四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2008年
2期
294-297
,共4页
杨林%何永红%沈永岱%刘磊%汤炜%郑晓辉%田卫东
楊林%何永紅%瀋永岱%劉磊%湯煒%鄭曉輝%田衛東
양림%하영홍%침영대%류뢰%탕위%정효휘%전위동
窖蛋白-1%AdEasy腺病毒载体%绿色荧光蛋白%同源重组
窖蛋白-1%AdEasy腺病毒載體%綠色熒光蛋白%同源重組
교단백-1%AdEasy선병독재체%록색형광단백%동원중조
目的 应用AdEasy重组腺病毒载体系统,构建携带小鼠窖蛋白-1(caveolin-1)编码区基因的复制缺陷型重组腺病毒载体 Ad-caveolin-1.方法 将质粒 pTRE2-caveolin-1 中的小鼠caveolin-1编码序列亚克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV中构建重组穿梭质粒pAdtrack-CMV-caveolin-1,酶切线性化后转入已含有病毒骨架质粒pAdEasy-1 的大肠杆菌中进行同源重组.筛得的病毒质粒pAd-caveolin-1 经酶切鉴定后,在293细胞中包装成重组腺病毒.荧光显微镜观察绿色荧光表达.扩增并纯化病毒,测定病毒滴度和重组病毒插入片段的序列.结果 重组腺病毒质粒经酶切鉴定证实成功构建了携带 caveolin-1 基因的重组腺病毒载体,转染293细胞后可出现明显的细胞病变效应,并观察到绿色荧光的表达,caveolin-1 基因测序鉴定与 GenBank 中公布序列一致.重组腺病毒的滴度为:2×109pfu/mL.结论 应用 AdEasy 系统成功地构建了重组腺病毒载体 Ad-caveolin-1,通过该系统携带的绿色荧光蛋白(GFP)标记基因可直观检测靶细胞转染和外源基因表达的情况.为进一步研究 caveolin-1 在牙齿发育中的作用莫定了基础.
目的 應用AdEasy重組腺病毒載體繫統,構建攜帶小鼠窖蛋白-1(caveolin-1)編碼區基因的複製缺陷型重組腺病毒載體 Ad-caveolin-1.方法 將質粒 pTRE2-caveolin-1 中的小鼠caveolin-1編碼序列亞剋隆到穿梭質粒pAdtrack-CMV中構建重組穿梭質粒pAdtrack-CMV-caveolin-1,酶切線性化後轉入已含有病毒骨架質粒pAdEasy-1 的大腸桿菌中進行同源重組.篩得的病毒質粒pAd-caveolin-1 經酶切鑒定後,在293細胞中包裝成重組腺病毒.熒光顯微鏡觀察綠色熒光錶達.擴增併純化病毒,測定病毒滴度和重組病毒插入片段的序列.結果 重組腺病毒質粒經酶切鑒定證實成功構建瞭攜帶 caveolin-1 基因的重組腺病毒載體,轉染293細胞後可齣現明顯的細胞病變效應,併觀察到綠色熒光的錶達,caveolin-1 基因測序鑒定與 GenBank 中公佈序列一緻.重組腺病毒的滴度為:2×109pfu/mL.結論 應用 AdEasy 繫統成功地構建瞭重組腺病毒載體 Ad-caveolin-1,通過該繫統攜帶的綠色熒光蛋白(GFP)標記基因可直觀檢測靶細胞轉染和外源基因錶達的情況.為進一步研究 caveolin-1 在牙齒髮育中的作用莫定瞭基礎.
목적 응용AdEasy중조선병독재체계통,구건휴대소서교단백-1(caveolin-1)편마구기인적복제결함형중조선병독재체 Ad-caveolin-1.방법 장질립 pTRE2-caveolin-1 중적소서caveolin-1편마서렬아극륭도천사질립pAdtrack-CMV중구건중조천사질립pAdtrack-CMV-caveolin-1,매절선성화후전입이함유병독골가질립pAdEasy-1 적대장간균중진행동원중조.사득적병독질립pAd-caveolin-1 경매절감정후,재293세포중포장성중조선병독.형광현미경관찰록색형광표체.확증병순화병독,측정병독적도화중조병독삽입편단적서렬.결과 중조선병독질립경매절감정증실성공구건료휴대 caveolin-1 기인적중조선병독재체,전염293세포후가출현명현적세포병변효응,병관찰도록색형광적표체,caveolin-1 기인측서감정여 GenBank 중공포서렬일치.중조선병독적적도위:2×109pfu/mL.결론 응용 AdEasy 계통성공지구건료중조선병독재체 Ad-caveolin-1,통과해계통휴대적록색형광단백(GFP)표기기인가직관검측파세포전염화외원기인표체적정황.위진일보연구 caveolin-1 재아치발육중적작용막정료기출.
