中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2009年
4期
464-467
,共4页
张舒婕%邓干臻%龚炎长%杨庆磊%胡福利%杨桓%彭秀丽
張舒婕%鄧榦臻%龔炎長%楊慶磊%鬍福利%楊桓%彭秀麗
장서첩%산간진%공염장%양경뢰%호복리%양환%팽수려
鸭%MHCⅡα基因%克隆%原核表达%纯化%多克隆抗体
鴨%MHCⅡα基因%剋隆%原覈錶達%純化%多剋隆抗體
압%MHCⅡα기인%극륭%원핵표체%순화%다극륭항체
根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a.转化大肠杆菌BL21中诱导表达.电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体.结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础.
根據NCBI上已髮錶的序列自行設計引物,通過RT-PCR從北京鴨脾髒的總RNA中擴增得到鴨MHCⅡα基因,將其剋隆至pMD18-T,經酶切分析及序列測定鑒定後,進一步亞剋隆至原覈錶達載體pET-28a.轉化大腸桿菌BL21中誘導錶達.電洗脫純化蛋白,用于免疫昆明小鼠製備多剋隆抗體.結果錶明:剋隆瞭鴨MHCⅡα基因,大小為633 bp,經覈苷痠測序與已登錄的基因序列同源性為99%;成功構建瞭原覈錶達載體,融閤蛋白得到瞭高效錶達且純化後純度可達90%,製備的鼠抗鴨MHCⅡα多剋隆抗體經酶聯免疫吸附試驗(ELISA)與免疫印跡法(Western-blot)證實瞭抗體的效價高、特異性彊,研究結果為研究鴨MHCⅡ分子奠定瞭基礎.
근거NCBI상이발표적서렬자행설계인물,통과RT-PCR종북경압비장적총RNA중확증득도압MHCⅡα기인,장기극륭지pMD18-T,경매절분석급서렬측정감정후,진일보아극륭지원핵표체재체pET-28a.전화대장간균BL21중유도표체.전세탈순화단백,용우면역곤명소서제비다극륭항체.결과표명:극륭료압MHCⅡα기인,대소위633 bp,경핵감산측서여이등록적기인서렬동원성위99%;성공구건료원핵표체재체,융합단백득도료고효표체차순화후순도가체90%,제비적서항압MHCⅡα다극륭항체경매련면역흡부시험(ELISA)여면역인적법(Western-blot)증실료항체적효개고、특이성강,연구결과위연구압MHCⅡ분자전정료기출.
