生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
5期
660-665
,共6页
何丽娟%习佳飞%曾泉%张博文%杨超%岳文%裴雪涛
何麗娟%習佳飛%曾泉%張博文%楊超%嶽文%裴雪濤
하려연%습가비%증천%장박문%양초%악문%배설도
人胚胎干细胞%转染%人胎肝基质细胞%碱性成纤维细胞生长因子
人胚胎榦細胞%轉染%人胎肝基質細胞%堿性成纖維細胞生長因子
인배태간세포%전염%인태간기질세포%감성성섬유세포생장인자
目的:以转染碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的人胎肝基质细胞株(FLSC)培养人胚胎干细胞(hESC),寻找更加安全、有效的体外培养扩增方法.方法:通过ELISA方法定量检测转基因的人FLSC条件培养基中bFGF的分泌量;以商业化的mTeSR1无血清无饲养层培养基、常规小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)条件培养基,以及转染bFGF的人FLSC条件培养基(bFGF/FLSC-CM)分别培养扩增H9细胞.通过观察hESC形态、免疫荧光染色、流式细胞检测及RT-PCR,检测hESC全能性标志物的表达.结果:ELISA方法检测bFGF/FLSC-CM中bFGF因子的分泌量为(770.09±17.28)pg/mL,而MEF-CM中bFGF因子的分泌量为(55.59±0.61)pg/mL,两者存在显著差异(P<0.01);在3种培养体系下,免疫荧光检测hESC全能性标志Oct-4、Tra-1-81抗体的表达均呈阳性,流式检测细胞表面阶段特异性胚胎抗原4(SSEA-4)抗体阳性细胞的比例均在99%左右;RT-PCR检测到hESC特异的转录因子Oct-4、Nanog、Sox-2的表达.结论:以转染bFGF的人FLSC条件培养基可以有效扩增hESC,可为临床应用提供一种安全、高效、低成本的无饲养层培养方法.
目的:以轉染堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的人胎肝基質細胞株(FLSC)培養人胚胎榦細胞(hESC),尋找更加安全、有效的體外培養擴增方法.方法:通過ELISA方法定量檢測轉基因的人FLSC條件培養基中bFGF的分泌量;以商業化的mTeSR1無血清無飼養層培養基、常規小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)條件培養基,以及轉染bFGF的人FLSC條件培養基(bFGF/FLSC-CM)分彆培養擴增H9細胞.通過觀察hESC形態、免疫熒光染色、流式細胞檢測及RT-PCR,檢測hESC全能性標誌物的錶達.結果:ELISA方法檢測bFGF/FLSC-CM中bFGF因子的分泌量為(770.09±17.28)pg/mL,而MEF-CM中bFGF因子的分泌量為(55.59±0.61)pg/mL,兩者存在顯著差異(P<0.01);在3種培養體繫下,免疫熒光檢測hESC全能性標誌Oct-4、Tra-1-81抗體的錶達均呈暘性,流式檢測細胞錶麵階段特異性胚胎抗原4(SSEA-4)抗體暘性細胞的比例均在99%左右;RT-PCR檢測到hESC特異的轉錄因子Oct-4、Nanog、Sox-2的錶達.結論:以轉染bFGF的人FLSC條件培養基可以有效擴增hESC,可為臨床應用提供一種安全、高效、低成本的無飼養層培養方法.
목적:이전염감성성섬유세포생장인자(bFGF)적인태간기질세포주(FLSC)배양인배태간세포(hESC),심조경가안전、유효적체외배양확증방법.방법:통과ELISA방법정량검측전기인적인FLSC조건배양기중bFGF적분비량;이상업화적mTeSR1무혈청무사양층배양기、상규소서배태성섬유세포(MEF)조건배양기,이급전염bFGF적인FLSC조건배양기(bFGF/FLSC-CM)분별배양확증H9세포.통과관찰hESC형태、면역형광염색、류식세포검측급RT-PCR,검측hESC전능성표지물적표체.결과:ELISA방법검측bFGF/FLSC-CM중bFGF인자적분비량위(770.09±17.28)pg/mL,이MEF-CM중bFGF인자적분비량위(55.59±0.61)pg/mL,량자존재현저차이(P<0.01);재3충배양체계하,면역형광검측hESC전능성표지Oct-4、Tra-1-81항체적표체균정양성,류식검측세포표면계단특이성배태항원4(SSEA-4)항체양성세포적비례균재99%좌우;RT-PCR검측도hESC특이적전록인자Oct-4、Nanog、Sox-2적표체.결론:이전염bFGF적인FLSC조건배양기가이유효확증hESC,가위림상응용제공일충안전、고효、저성본적무사양층배양방법.
