CAJ | 학술논문

目的:探讨以重组腺相关病毒(rAAV)介导内皮抑素(ES)基因转移对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)的抑制作用.方法:选取SPF级SD大鼠 60只,角膜缝线法制作CNV模型,随机分为A,B,C和D共4组.A组:缝线后立即于上方近角膜缘处结膜下注射50μL rAAV-ES转染液;B组:缝线后刮除角膜上皮,用rAAV-ES转染液浸泡角膜10min;C组:缝线后用rAAV-ES转染液浸泡去上皮角膜10min后,同样部位结膜下注射50μL rAAV-ES转染液;D组:对照组,同样部位结膜下注射50μL生理盐水.在裂隙灯显微镜下观察各组CNV的生长情况,并计算其面积;免疫组织化学法观察ES基因表达情况;病理切片检测CNV密度;观察ES基因转移对CNV的抑制作用.结果:裂隙灯显微镜下观察各组大鼠缝线后CNV逐渐生长,14d达高峰,其后逐渐减少;21d后变性.定量数据重复测量的方差分析显示:时间因素与治疗因素之间存在交互效应(F=175.810,P<0.01).缝线诱导后不同转染组间CNV面积亦有显著性差异(F=2243.816,P<0.01);其中以D组CNV面积最大;C组CNV面积最小.不同时间段CNV生长面积之间差异显著(F=1060.854,P<0.01);对CNV增生的抑制率随着转染时间的延长而增加,C组在缝线后28d,对CNV增殖的抑制率高达到58.25%.免疫组织化学检测显示:A组于上方角膜缘结膜和角膜上皮中可见ES染色阳性;B组在浅基质CNV的内皮细胞中发现少量ES染色阳性;C组角膜上皮及浅基质CNV的内皮细胞中可见较为明显的ES染色阳性; D组角膜细胞均为ES染色阴性.角膜切片结果显示:CNV密度在各转染组均比对照组稀疏.结论:rAAV-ES转基因可明显抑制缝线诱导的大鼠CNV的增生.采用单独结膜下注射rAAV-ES转染液或转染液局部浸泡去上皮角膜的转染途径均能抑制缝线诱导的CNV增生,联合转染途径对缝线诱导CNV增生的抑制效果更好.
목적:탐토이중조선상관병독(rAAV)개도내피억소(ES)기인전이대대서각막신생혈관(corneal neovascularization,CNV)적억제작용.방법:선취SPF급SD대서 60지,각막봉선법제작CNV모형,수궤분위A,B,C화D공4조.A조:봉선후립즉우상방근각막연처결막하주사50μL rAAV-ES전염액;B조:봉선후괄제각막상피,용rAAV-ES전염액침포각막10min;C조:봉선후용rAAV-ES전염액침포거상피각막10min후,동양부위결막하주사50μL rAAV-ES전염액;D조:대조조,동양부위결막하주사50μL생리염수.재렬극등현미경하관찰각조CNV적생장정황,병계산기면적;면역조직화학법관찰ES기인표체정황;병리절편검측CNV밀도;관찰ES기인전이대CNV적억제작용.결과:렬극등현미경하관찰각조대서봉선후CNV축점생장,14d체고봉,기후축점감소;21d후변성.정량수거중복측량적방차분석현시:시간인소여치료인소지간존재교호효응(F=175.810,P<0.01).봉선유도후불동전염조간CNV면적역유현저성차이(F=2243.816,P<0.01);기중이D조CNV면적최대;C조CNV면적최소.불동시간단CNV생장면적지간차이현저(F=1060.854,P<0.01);대CNV증생적억제솔수착전염시간적연장이증가,C조재봉선후28d,대CNV증식적억제솔고체도58.25%.면역조직화학검측현시:A조우상방각막연결막화각막상피중가견ES염색양성;B조재천기질CNV적내피세포중발현소량ES염색양성;C조각막상피급천기질CNV적내피세포중가견교위명현적ES염색양성; D조각막세포균위ES염색음성.각막절편결과현시:CNV밀도재각전염조균비대조조희소.결론:rAAV-ES전기인가명현억제봉선유도적대서CNV적증생.채용단독결막하주사rAAV-ES전염액혹전염액국부침포거상피각막적전염도경균능억제봉선유도적CNV증생,연합전염도경대봉선유도CNV증생적억제효과경호.