CAJ | 학술논문

目的:在大肠杆菌中表达并纯化出具有良好生物学活性的卡介苗HSP70(BCG HSP70)蛋白.方法:利用PCR技术扩增出BCG HSP70的编码基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序分析.再将该目的基因亚克隆至pET28a表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后,用IPTG诱导表达.纯化表达产物,SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白,并通过脾增生实验检测其生物学活性.结果:扩增的BCG HSP70基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致.表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr)约70 000处有表达条带.Western blot结果证实纯化产物在Mr约70 000处可见特异性条带.蛋白纯度约96.5%.脾细胞增生试验显示,该蛋白能够明显刺激鼠脾细胞增殖.结论:成功表达并纯化了具有良好生物学活性的BCG HSP70,为进一步研究BCG HSP70及BCG的功能奠定了基础.
목적:재대장간균중표체병순화출구유량호생물학활성적잡개묘HSP70(BCG HSP70)단백.방법:이용PCR기술확증출BCG HSP70적편마기인,장기극륭도pMD18-T재체,측서분석.재장해목적기인아극륭지pET28a표체재체,전화입대장간균BL21(DE3),획득정학적양성극륭자후,용IPTG유도표체.순화표체산물,SDS-PAGE급Western blot감정목적단백,병통과비증생실험검측기생물학활성.결과:확증적BCG HSP70기인경서렬측정여GenBank공포적서렬완전일치.표체산물경SDS-PAGE분석,재상대분자질량(Mr)약70 000처유표체조대.Western blot결과증실순화산물재Mr약70 000처가견특이성조대.단백순도약96.5%.비세포증생시험현시,해단백능구명현자격서비세포증식.결론:성공표체병순화료구유량호생물학활성적BCG HSP70,위진일보연구BCG HSP70급BCG적공능전정료기출.