CAJ | 학술논문

目的:探讨磷酸二酯酶4(PDE4)特异性抑制剂咯利普兰(rolipram)对抗慢性应激诱导的抑郁和焦虑样行为的分子机制.方法:(1)将40只SD大鼠分为4组(每组10只):空白对照组、模型组、阳性对照药氯化锂(LiCl)组及rolipram组,并进行应激前旷场实验.给予慢性束缚应激21 d 后,分别进行强迫游泳、高架十字迷宫及应激后旷场实验.最后一次行为学实验结束后立即处死动物并取双侧海马组织,免疫印迹法检测海马内磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、磷酸化丝氨酸残基21糖原合成酶激酶3α(p-Ser21-GSK3α)、磷酸化丝氨酸残基9糖原合成酶激酶3β(p-Ser9-GSK3β)、磷酸化酪氨酸残基279糖原合成酶激酶3α(p-Tyr279-GSK3α)、磷酸化酪氨酸残基216糖原合成酶激酶3β(p-Tyr216-GSK3β)、总糖原合成酶激酶3α(total GSK3α)及总糖原合成酶激酶3β(total GSK3β)的表达.(2)30只SD大鼠平均分为6组,双侧海马CA1区手术埋管并恢复7 d 后进行慢性应激处理21 d,并在每次应激前微量注射蛋白激酶A(PKA)的拮抗剂H89,并腹腔注射LiCl和rolipram.双侧海马用于检测PDE4D、p-CREB和p-Ser9-GSK3β的表达.结果:(1)应激前各组动物自主活动能力无显著差异,应激14 d及21 d后应激组与空白对照组相比体重显著下降,LiCl及rolipram均显著逆转了应激对体重的下调作用.应激显著增加了强迫游泳实验中动物的不动时间,减少了攀爬时间和高架十字迷宫实验中进入开臂的次数及时间,表现出抑郁和焦虑样行为,而LiCl及rolipram均显著逆转了慢性束缚应激诱导的上述行为障碍.免疫印迹结果显示rolipram可显著逆转应激对p-CREB、BDNF、p-Ser21-GSK3α和p-Ser9-GSK3β表达的下调作用,而LiCl仅显著上调p-Ser21-GSK3α及p-Ser9-GSK3β的表达.各组p-Tyr279-GSK3α、p-Tyr216-GSK3β、total GSK3α及total GSK3β的表达无显著差异.(2)慢性应激诱导了大鼠海马内PDE4D表达的上调,PKA、p-CREB及p-Ser9-GSK3β的下调.Rolipram显著逆转了上述效应,且H89显著阻断了Rolipram的药物效应.结论:Rolipram抗抑郁及抗焦虑作用不仅通过CREB/BDNF信号通路,而且还有GSK3 抑制性丝氨酸残基磷酸化信号通路的参与,且CREB介导的信号转导通路对GSK3 抑制性丝氨酸残基磷酸化信号通路发挥重要调节作用. 目的:探討燐痠二酯酶4(PDE4)特異性抑製劑咯利普蘭(rolipram)對抗慢性應激誘導的抑鬱和焦慮樣行為的分子機製.方法:(1)將40隻SD大鼠分為4組(每組10隻):空白對照組、模型組、暘性對照藥氯化鋰(LiCl)組及rolipram組,併進行應激前曠場實驗.給予慢性束縳應激21 d 後,分彆進行彊迫遊泳、高架十字迷宮及應激後曠場實驗.最後一次行為學實驗結束後立即處死動物併取雙側海馬組織,免疫印跡法檢測海馬內燐痠化cAMP反應元件結閤蛋白(p-CREB)、腦源性神經營養因子(BDNF)、燐痠化絲氨痠殘基21糖原閤成酶激酶3α(p-Ser21-GSK3α)、燐痠化絲氨痠殘基9糖原閤成酶激酶3β(p-Ser9-GSK3β)、燐痠化酪氨痠殘基279糖原閤成酶激酶3α(p-Tyr279-GSK3α)、燐痠化酪氨痠殘基216糖原閤成酶激酶3β(p-Tyr216-GSK3β)、總糖原閤成酶激酶3α(total GSK3α)及總糖原閤成酶激酶3β(total GSK3β)的錶達.(2)30隻SD大鼠平均分為6組,雙側海馬CA1區手術埋管併恢複7 d 後進行慢性應激處理21 d,併在每次應激前微量註射蛋白激酶A(PKA)的拮抗劑H89,併腹腔註射LiCl和rolipram.雙側海馬用于檢測PDE4D、p-CREB和p-Ser9-GSK3β的錶達.結果:(1)應激前各組動物自主活動能力無顯著差異,應激14 d及21 d後應激組與空白對照組相比體重顯著下降,LiCl及rolipram均顯著逆轉瞭應激對體重的下調作用.應激顯著增加瞭彊迫遊泳實驗中動物的不動時間,減少瞭攀爬時間和高架十字迷宮實驗中進入開臂的次數及時間,錶現齣抑鬱和焦慮樣行為,而LiCl及rolipram均顯著逆轉瞭慢性束縳應激誘導的上述行為障礙.免疫印跡結果顯示rolipram可顯著逆轉應激對p-CREB、BDNF、p-Ser21-GSK3α和p-Ser9-GSK3β錶達的下調作用,而LiCl僅顯著上調p-Ser21-GSK3α及p-Ser9-GSK3β的錶達.各組p-Tyr279-GSK3α、p-Tyr216-GSK3β、total GSK3α及total GSK3β的錶達無顯著差異.(2)慢性應激誘導瞭大鼠海馬內PDE4D錶達的上調,PKA、p-CREB及p-Ser9-GSK3β的下調.Rolipram顯著逆轉瞭上述效應,且H89顯著阻斷瞭Rolipram的藥物效應.結論:Rolipram抗抑鬱及抗焦慮作用不僅通過CREB/BDNF信號通路,而且還有GSK3 抑製性絲氨痠殘基燐痠化信號通路的參與,且CREB介導的信號轉導通路對GSK3 抑製性絲氨痠殘基燐痠化信號通路髮揮重要調節作用.
목적:탐토린산이지매4(PDE4)특이성억제제각리보란(rolipram)대항만성응격유도적억욱화초필양행위적분자궤제.방법:(1)장40지SD대서분위4조(매조10지):공백대조조、모형조、양성대조약록화리(LiCl)조급rolipram조,병진행응격전광장실험.급여만성속박응격21 d 후,분별진행강박유영、고가십자미궁급응격후광장실험.최후일차행위학실험결속후립즉처사동물병취쌍측해마조직,면역인적법검측해마내린산화cAMP반응원건결합단백(p-CREB)、뇌원성신경영양인자(BDNF)、린산화사안산잔기21당원합성매격매3α(p-Ser21-GSK3α)、린산화사안산잔기9당원합성매격매3β(p-Ser9-GSK3β)、린산화락안산잔기279당원합성매격매3α(p-Tyr279-GSK3α)、린산화락안산잔기216당원합성매격매3β(p-Tyr216-GSK3β)、총당원합성매격매3α(total GSK3α)급총당원합성매격매3β(total GSK3β)적표체.(2)30지SD대서평균분위6조,쌍측해마CA1구수술매관병회복7 d 후진행만성응격처리21 d,병재매차응격전미량주사단백격매A(PKA)적길항제H89,병복강주사LiCl화rolipram.쌍측해마용우검측PDE4D、p-CREB화p-Ser9-GSK3β적표체.결과:(1)응격전각조동물자주활동능력무현저차이,응격14 d급21 d후응격조여공백대조조상비체중현저하강,LiCl급rolipram균현저역전료응격대체중적하조작용.응격현저증가료강박유영실험중동물적불동시간,감소료반파시간화고가십자미궁실험중진입개비적차수급시간,표현출억욱화초필양행위,이LiCl급rolipram균현저역전료만성속박응격유도적상술행위장애.면역인적결과현시rolipram가현저역전응격대p-CREB、BDNF、p-Ser21-GSK3α화p-Ser9-GSK3β표체적하조작용,이LiCl부현저상조p-Ser21-GSK3α급p-Ser9-GSK3β적표체.각조p-Tyr279-GSK3α、p-Tyr216-GSK3β、total GSK3α급total GSK3β적표체무현저차이.(2)만성응격유도료대서해마내PDE4D표체적상조,PKA、p-CREB급p-Ser9-GSK3β적하조.Rolipram현저역전료상술효응,차H89현저조단료Rolipram적약물효응.결론:Rolipram항억욱급항초필작용불부통과CREB/BDNF신호통로,이차환유GSK3 억제성사안산잔기린산화신호통로적삼여,차CREB개도적신호전도통로대GSK3 억제성사안산잔기린산화신호통로발휘중요조절작용.