中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2012年
10期
1861-1867
,共7页
肖定璋%陈少贤%陈景%罗琼%黄曙方%丁红
肖定璋%陳少賢%陳景%囉瓊%黃曙方%丁紅
초정장%진소현%진경%라경%황서방%정홍
巨噬细胞移动抑制因子%巯基蛋白质氧化还原酶%酵母双杂交系统%蛋白质相互作用%硫氧还蛋白样蛋白2
巨噬細胞移動抑製因子%巰基蛋白質氧化還原酶%酵母雙雜交繫統%蛋白質相互作用%硫氧還蛋白樣蛋白2
거서세포이동억제인자%구기단백질양화환원매%효모쌍잡교계통%단백질상호작용%류양환단백양단백2
目的:筛选与巨噬细胞移动抑制因子(MIF)催化巯基蛋白质氧化还原酶(TPOR)活性域相互结合的蛋白.方法:采用酵母双杂交系统进行筛选.首先构建pBTM116-MIF诱饵质粒,转化酵母菌株L40;将表达MIF催化 TPOR活性域的L40酵母菌株制备成感受态菌,在人骨肉瘤cDNA文库中筛选.通过组氨酸(HIS3报告基因活性和β半乳糖苷酶实验,初步确定与催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最终通过免疫共沉淀和免疫荧光技术来确认.结果:分别构建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧还蛋白样蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2质粒,将其共转染L40酵母菌.HIS3报告基因活性检测和β半乳糖苷酶阳性实验结果提示TXNL2可能是与MIF催化 TPOR活性片段相互作用的蛋白.将重组质粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2转染MCF7细胞,免疫共沉淀实验结果表明MIF抗体能够共沉淀Myc-TXNL2蛋白;免疫荧光结果显示Myc-TXNL2与MIF在细胞质中位置分布相同.结论:TXNL2可能是与MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白.本研究为MIF氧化还原机制的研究提供了新的实验依据.
目的:篩選與巨噬細胞移動抑製因子(MIF)催化巰基蛋白質氧化還原酶(TPOR)活性域相互結閤的蛋白.方法:採用酵母雙雜交繫統進行篩選.首先構建pBTM116-MIF誘餌質粒,轉化酵母菌株L40;將錶達MIF催化 TPOR活性域的L40酵母菌株製備成感受態菌,在人骨肉瘤cDNA文庫中篩選.通過組氨痠(HIS3報告基因活性和β半乳糖苷酶實驗,初步確定與催化TPOR活性域片段相互作用的蛋白,最終通過免疫共沉澱和免疫熒光技術來確認.結果:分彆構建含野生型MIF的pBTM116-MIF和野生型硫氧還蛋白樣蛋白2(TXNL2)的pACT2-TXNL2質粒,將其共轉染L40酵母菌.HIS3報告基因活性檢測和β半乳糖苷酶暘性實驗結果提示TXNL2可能是與MIF催化 TPOR活性片段相互作用的蛋白.將重組質粒pcDNA3.1-Myc-TXNL2轉染MCF7細胞,免疫共沉澱實驗結果錶明MIF抗體能夠共沉澱Myc-TXNL2蛋白;免疫熒光結果顯示Myc-TXNL2與MIF在細胞質中位置分佈相同.結論:TXNL2可能是與MIF催化TPOR活性片段相互作用的蛋白.本研究為MIF氧化還原機製的研究提供瞭新的實驗依據.
목적:사선여거서세포이동억제인자(MIF)최화구기단백질양화환원매(TPOR)활성역상호결합적단백.방법:채용효모쌍잡교계통진행사선.수선구건pBTM116-MIF유이질립,전화효모균주L40;장표체MIF최화 TPOR활성역적L40효모균주제비성감수태균,재인골육류cDNA문고중사선.통과조안산(HIS3보고기인활성화β반유당감매실험,초보학정여최화TPOR활성역편단상호작용적단백,최종통과면역공침정화면역형광기술래학인.결과:분별구건함야생형MIF적pBTM116-MIF화야생형류양환단백양단백2(TXNL2)적pACT2-TXNL2질립,장기공전염L40효모균.HIS3보고기인활성검측화β반유당감매양성실험결과제시TXNL2가능시여MIF최화 TPOR활성편단상호작용적단백.장중조질립pcDNA3.1-Myc-TXNL2전염MCF7세포,면역공침정실험결과표명MIF항체능구공침정Myc-TXNL2단백;면역형광결과현시Myc-TXNL2여MIF재세포질중위치분포상동.결론:TXNL2가능시여MIF최화TPOR활성편단상호작용적단백.본연구위MIF양화환원궤제적연구제공료신적실험의거.
