现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2004年
4期
294-298
,共5页
PCR%优化%实验研究
PCR%優化%實驗研究
PCR%우화%실험연구
目的探讨PCR扩增体系中各种成分因子的优化组合,以期为真核生物的分子生物学研究提供可靠方法.方法通过对参与PCR基因扩增体系的成分在一定范围内设置不同的浓度或参数组,进行单因子或复因子检测,观测各因子在不同条件下对扩增结果的影响.结果不同模板含量、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg 2+浓度和退火温度对反应结果有不同程度的影响.本研究建立的PCR基因扩增反应体系是反应总体积25μl,其中10×扩增缓冲液2.5μl、2mMMg2+2μl、200μM的dNTPs 2μl、0.2μM引物0.5μl、3u/μl的Taq DNA聚合酶0.42μl和25ng的模板DNA,退火温度 39℃.扩增程序为94℃预变性300秒,然后94℃60秒,39℃60秒,72℃120秒,共45个循环后 72℃延伸300秒.结论通过对PCR扩增体系中各种成分因子的优化,本研究建立的PCR基因扩增体系特异性高且稳定可靠.
目的探討PCR擴增體繫中各種成分因子的優化組閤,以期為真覈生物的分子生物學研究提供可靠方法.方法通過對參與PCR基因擴增體繫的成分在一定範圍內設置不同的濃度或參數組,進行單因子或複因子檢測,觀測各因子在不同條件下對擴增結果的影響.結果不同模闆含量、引物濃度、Taq DNA聚閤酶用量、dNTP濃度、Mg 2+濃度和退火溫度對反應結果有不同程度的影響.本研究建立的PCR基因擴增反應體繫是反應總體積25μl,其中10×擴增緩遲液2.5μl、2mMMg2+2μl、200μM的dNTPs 2μl、0.2μM引物0.5μl、3u/μl的Taq DNA聚閤酶0.42μl和25ng的模闆DNA,退火溫度 39℃.擴增程序為94℃預變性300秒,然後94℃60秒,39℃60秒,72℃120秒,共45箇循環後 72℃延伸300秒.結論通過對PCR擴增體繫中各種成分因子的優化,本研究建立的PCR基因擴增體繫特異性高且穩定可靠.
목적탐토PCR확증체계중각충성분인자적우화조합,이기위진핵생물적분자생물학연구제공가고방법.방법통과대삼여PCR기인확증체계적성분재일정범위내설치불동적농도혹삼수조,진행단인자혹복인자검측,관측각인자재불동조건하대확증결과적영향.결과불동모판함량、인물농도、Taq DNA취합매용량、dNTP농도、Mg 2+농도화퇴화온도대반응결과유불동정도적영향.본연구건립적PCR기인확증반응체계시반응총체적25μl,기중10×확증완충액2.5μl、2mMMg2+2μl、200μM적dNTPs 2μl、0.2μM인물0.5μl、3u/μl적Taq DNA취합매0.42μl화25ng적모판DNA,퇴화온도 39℃.확증정서위94℃예변성300초,연후94℃60초,39℃60초,72℃120초,공45개순배후 72℃연신300초.결론통과대PCR확증체계중각충성분인자적우화,본연구건립적PCR기인확증체계특이성고차은정가고.
