中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2004年
5期
508-511
,共4页
梁平%潘扬杏%赵雪梅%杜洪震%张冀民
樑平%潘颺杏%趙雪梅%杜洪震%張冀民
량평%반양행%조설매%두홍진%장기민
β-淀粉样变多肽%早老素-1%β-或γ-分泌酶%基因转染
β-澱粉樣變多肽%早老素-1%β-或γ-分泌酶%基因轉染
β-정분양변다태%조로소-1%β-혹γ-분비매%기인전염
目的构建APP751和PS-1(M146L)双重基因稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,以用于β-分泌酶或γ-分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选.方法从人胎盘基因文库中用多聚酶链反应(PCR)方法扩增野生型和突变型PS-1(M146L)基因,并重组克隆到PCI-neo质粒,用脂质体(LipofectAmine)法将野生型和突变型(M146L)PS-1转染至含APP751表达基因的CHO细胞,选择培养液筛选能稳定表达目的基因的CHO细胞株.用免疫沉淀和ELISA测定分析细胞表达产物.结果建立了数株能表达Aβ和PS-1的CHO细胞.在转染细胞株中高表达的SP-1为全长45 kd的PS-1蛋白;野生型PS-1和突变型PS-1(M146L)以及单纯APP751转染的CHO细胞株均可分泌Aβ多肽,且突变型PS-1(M146L)转染的细胞株分泌到条件培养液中的Aβ1-42比其它细胞株增加了近两倍.结论突变型PS-1(M 146L)的高表达可促使Aβ1～42的分泌增加.我们建立的PS-1和APP双重基因稳定转染的CHO细胞株模型,可用于β-分泌酶或γ-分泌酶抑制剂的研究和相关药物的筛选.
目的構建APP751和PS-1(M146L)雙重基因穩定轉染的中國倉鼠卵巢(CHO)細胞繫,以用于β-分泌酶或γ-分泌酶抑製劑的研究和相關藥物的篩選.方法從人胎盤基因文庫中用多聚酶鏈反應(PCR)方法擴增野生型和突變型PS-1(M146L)基因,併重組剋隆到PCI-neo質粒,用脂質體(LipofectAmine)法將野生型和突變型(M146L)PS-1轉染至含APP751錶達基因的CHO細胞,選擇培養液篩選能穩定錶達目的基因的CHO細胞株.用免疫沉澱和ELISA測定分析細胞錶達產物.結果建立瞭數株能錶達Aβ和PS-1的CHO細胞.在轉染細胞株中高錶達的SP-1為全長45 kd的PS-1蛋白;野生型PS-1和突變型PS-1(M146L)以及單純APP751轉染的CHO細胞株均可分泌Aβ多肽,且突變型PS-1(M146L)轉染的細胞株分泌到條件培養液中的Aβ1-42比其它細胞株增加瞭近兩倍.結論突變型PS-1(M 146L)的高錶達可促使Aβ1～42的分泌增加.我們建立的PS-1和APP雙重基因穩定轉染的CHO細胞株模型,可用于β-分泌酶或γ-分泌酶抑製劑的研究和相關藥物的篩選.
목적구건APP751화PS-1(M146L)쌍중기인은정전염적중국창서란소(CHO)세포계,이용우β-분비매혹γ-분비매억제제적연구화상관약물적사선.방법종인태반기인문고중용다취매련반응(PCR)방법확증야생형화돌변형PS-1(M146L)기인,병중조극륭도PCI-neo질립,용지질체(LipofectAmine)법장야생형화돌변형(M146L)PS-1전염지함APP751표체기인적CHO세포,선택배양액사선능은정표체목적기인적CHO세포주.용면역침정화ELISA측정분석세포표체산물.결과건립료수주능표체Aβ화PS-1적CHO세포.재전염세포주중고표체적SP-1위전장45 kd적PS-1단백;야생형PS-1화돌변형PS-1(M146L)이급단순APP751전염적CHO세포주균가분비Aβ다태,차돌변형PS-1(M146L)전염적세포주분비도조건배양액중적Aβ1-42비기타세포주증가료근량배.결론돌변형PS-1(M 146L)적고표체가촉사Aβ1～42적분비증가.아문건립적PS-1화APP쌍중기인은정전염적CHO세포주모형,가용우β-분비매혹γ-분비매억제제적연구화상관약물적사선.
