细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
3期
257-259
,共3页
黄博%于芳%王孝功%白丽圆%李华%卢兹凡
黃博%于芳%王孝功%白麗圓%李華%盧玆凡
황박%우방%왕효공%백려원%리화%로자범
QKI-7%原核表达%蛋白纯化%多克隆抗体
QKI-7%原覈錶達%蛋白純化%多剋隆抗體
QKI-7%원핵표체%단백순화%다극륭항체
目的:获得原核表达的RNA结合蛋白QKI-7蛋白, 并制备其兔抗QKI多克隆抗体.方法:将成功插入QKI-7编码区cDNA的PET32b(+)原核表达载体用热休克法转化BL21(DE3) 感受态细菌, 以IPTG诱导6×His-QKI-7融合蛋白的表达, 分别经金属鳌合柱、反向柱和强阴离子交换柱进行层析纯化.经SDS-PAGE和Western blot鉴定后, 应用纯化的融合蛋白, 分别以弗氏佐剂、聚丙烯酰胺凝胶、 NC膜作为佐剂免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体, 并以Western blot进行检测.结果:经表达并纯化的QKI-7蛋白纯度达到95%以上, 应用纯化的融合蛋白以弗氏佐剂作为佐剂免疫新西兰大白兔后获得高滴度, 特异性的抗QKI的多克隆抗体.结论:成功地表达并纯化了QKI-7蛋白, 并制备了高滴度、高特异性的抗QKI多克隆抗体.采用弗氏佐剂作为免疫佐剂进行免疫的效果优于聚丙烯酰胺凝胶和NC膜.
目的:穫得原覈錶達的RNA結閤蛋白QKI-7蛋白, 併製備其兔抗QKI多剋隆抗體.方法:將成功插入QKI-7編碼區cDNA的PET32b(+)原覈錶達載體用熱休剋法轉化BL21(DE3) 感受態細菌, 以IPTG誘導6×His-QKI-7融閤蛋白的錶達, 分彆經金屬鼇閤柱、反嚮柱和彊陰離子交換柱進行層析純化.經SDS-PAGE和Western blot鑒定後, 應用純化的融閤蛋白, 分彆以弗氏佐劑、聚丙烯酰胺凝膠、 NC膜作為佐劑免疫新西蘭大白兔製備多剋隆抗體, 併以Western blot進行檢測.結果:經錶達併純化的QKI-7蛋白純度達到95%以上, 應用純化的融閤蛋白以弗氏佐劑作為佐劑免疫新西蘭大白兔後穫得高滴度, 特異性的抗QKI的多剋隆抗體.結論:成功地錶達併純化瞭QKI-7蛋白, 併製備瞭高滴度、高特異性的抗QKI多剋隆抗體.採用弗氏佐劑作為免疫佐劑進行免疫的效果優于聚丙烯酰胺凝膠和NC膜.
목적:획득원핵표체적RNA결합단백QKI-7단백, 병제비기토항QKI다극륭항체.방법:장성공삽입QKI-7편마구cDNA적PET32b(+)원핵표체재체용열휴극법전화BL21(DE3) 감수태세균, 이IPTG유도6×His-QKI-7융합단백적표체, 분별경금속오합주、반향주화강음리자교환주진행층석순화.경SDS-PAGE화Western blot감정후, 응용순화적융합단백, 분별이불씨좌제、취병희선알응효、 NC막작위좌제면역신서란대백토제비다극륭항체, 병이Western blot진행검측.결과:경표체병순화적QKI-7단백순도체도95%이상, 응용순화적융합단백이불씨좌제작위좌제면역신서란대백토후획득고적도, 특이성적항QKI적다극륭항체.결론:성공지표체병순화료QKI-7단백, 병제비료고적도、고특이성적항QKI다극륭항체.채용불씨좌제작위면역좌제진행면역적효과우우취병희선알응효화NC막.
