CAJ | 학술논문

目的:观察差速贴壁技术对星形胶质细胞纯化率的影响,旨在建立一套可靠的大鼠脑皮质星形胶质细胞的取材分离、纯化培养技术.方法:实验于2006-06/08在泰山医学院生命科学研究所完成.实验材料:出生2～3 d的Wistar大鼠,雌雄不拘,由泰山医学院生命科学研究所实验动物中心提供.实验方法:选用出生二三天的Wistar大鼠进行脑皮质星形胶质细胞原代培养.实验分两组殚培养:常规培养组和差速贴壁培养组.差速贴壁培养组分别于15,30 min取出,轻轻翻转培养瓶,将上清液移至另一培养瓶中,放入培养箱中继续培养.7～10 d后传代,待细胞分层生长后,置于37 ℃摇床中250r/min振荡18 h,倒掉上清液,D-Hank's液洗3次后,加入0.25%胰酶消化,倒置显微镜下观察,待细胞突起回缩后加入含血清的培养基终止消化,用吸管反复吹打使细胞从瓶壁上脱落,细胞悬液1 000 r/min离心5 min后,弃上清液,加入含体积分数为0.2血清的DMEM培养基混悬沉淀,接种人预先涂有L-多聚赖氨酸的培养瓶中继续培养.采用双重免疫荧光法鉴定星形胶质细胞纯度,测定积分吸光度值判断星形胶质细胞的生长状况.结果:①应用差速贴壁技术培养星形胶质细胞可明显提高星形胶质细胞纯度[常规培养组:(82±3)%,差速贴壁培养组15 min:(94±2)%,差速贴壁培养组30 min:(95±2)%,P＜0.01].差速贴壁需要充分的时间,15 min组和30 min组在提高星形胶质细胞纯度方面无明显差别.②差速贴壁培养组星形胶质细胞积分吸光度值高于常规培养组(常规培养组:528±25,差速贴壁培养组15 min:972±17,差速贴壁培养组30 min:996±35,P＜0.05).结论:①差速贴壁技术可明显提高星形胶质细胞纯化度,并且星形胶质细胞生长状态明显优于常规培养方法.②最佳差速贴壁时间为15 min,过长差速贴壁时间对提高星形胶质细胞纯度无明显影响.
목적:관찰차속첩벽기술대성형효질세포순화솔적영향,지재건립일투가고적대서뇌피질성형효질세포적취재분리、순화배양기술.방법:실험우2006-06/08재태산의학원생명과학연구소완성.실험재료:출생2～3 d적Wistar대서,자웅불구,유태산의학원생명과학연구소실험동물중심제공.실험방법:선용출생이삼천적Wistar대서진행뇌피질성형효질세포원대배양.실험분량조탄배양:상규배양조화차속첩벽배양조.차속첩벽배양조분별우15,30 min취출,경경번전배양병,장상청액이지령일배양병중,방입배양상중계속배양.7～10 d후전대,대세포분층생장후,치우37 ℃요상중250r/min진탕18 h,도도상청액,D-Hank's액세3차후,가입0.25%이매소화,도치현미경하관찰,대세포돌기회축후가입함혈청적배양기종지소화,용흡관반복취타사세포종병벽상탈락,세포현액1 000 r/min리심5 min후,기상청액,가입함체적분수위0.2혈청적DMEM배양기혼현침정,접충인예선도유L-다취뢰안산적배양병중계속배양.채용쌍중면역형광법감정성형효질세포순도,측정적분흡광도치판단성형효질세포적생장상황.결과:①응용차속첩벽기술배양성형효질세포가명현제고성형효질세포순도[상규배양조:(82±3)%,차속첩벽배양조15 min:(94±2)%,차속첩벽배양조30 min:(95±2)%,P＜0.01].차속첩벽수요충분적시간,15 min조화30 min조재제고성형효질세포순도방면무명현차별.②차속첩벽배양조성형효질세포적분흡광도치고우상규배양조(상규배양조:528±25,차속첩벽배양조15 min:972±17,차속첩벽배양조30 min:996±35,P＜0.05).결론:①차속첩벽기술가명현제고성형효질세포순화도,병차성형효질세포생장상태명현우우상규배양방법.②최가차속첩벽시간위15 min,과장차속첩벽시간대제고성형효질세포순도무명현영향.