潍坊医学院学报
濰坊醫學院學報
유방의학원학보
JOURNAL OF WEIFANG MEDICAL COLLEGE
2008年
3期
193-195
,共3页
梁淑娟%吴慧娜%肖伟玲%牟东珍%刘艳艳
樑淑娟%吳慧娜%肖偉玲%牟東珍%劉豔豔
량숙연%오혜나%초위령%모동진%류염염
IL-1β%反义RNA%肝癌
IL-1β%反義RNA%肝癌
IL-1β%반의RNA%간암
目的 构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察对肝癌细胞中IL-1β表达的阻断效果.方法 提取细胞总RNA,RT-PCR扩增IL-1β1和lL-1β2,将其反向连接到肝癌组织特异性表达载体PafpIRES2-EGFP,构建PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反义RNA表达载体,利用jetPEI转染H22肝癌细胞和YAC-1淋巴细胞,荧光显微镜下观察反义RNA载体的表达,RT-PCR方法分析H22细胞中IL-1β表达水平的变化.结果 RT-PCR扩增到两条长度分别为264和284bp的片段,与IL-1β1和IL-1β2相符,将其反向与PafpIRES2-EGFP连接,经菌落PCR和DNA序列分析证实,获得了PafplRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antilL-1β2反义RNA表达载体.上述载体转染H22细胞后,荧光显微镜下可见细胞表达出明亮绿色荧光,而YAC-1细胞则未见荧光.RT-PCR分析证实转染反义RNA后H22细胞中IL-1β表达水平明显下降,尤以IL-1β2反义RNA的阻断效果更为显著.结论 成功构建了小鼠IL-1β肝癌细胞特异性反义RNA表达载体PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,两裁体能有效地阻断肝癌细胞中IL-1β的表达.
目的 構建小鼠IL-1β反義RNA錶達載體,觀察對肝癌細胞中IL-1β錶達的阻斷效果.方法 提取細胞總RNA,RT-PCR擴增IL-1β1和lL-1β2,將其反嚮連接到肝癌組織特異性錶達載體PafpIRES2-EGFP,構建PafpIRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antiIL-1β2反義RNA錶達載體,利用jetPEI轉染H22肝癌細胞和YAC-1淋巴細胞,熒光顯微鏡下觀察反義RNA載體的錶達,RT-PCR方法分析H22細胞中IL-1β錶達水平的變化.結果 RT-PCR擴增到兩條長度分彆為264和284bp的片段,與IL-1β1和IL-1β2相符,將其反嚮與PafpIRES2-EGFP連接,經菌落PCR和DNA序列分析證實,穫得瞭PafplRES2-antiIL-1β1和PafpIRES2-antilL-1β2反義RNA錶達載體.上述載體轉染H22細胞後,熒光顯微鏡下可見細胞錶達齣明亮綠色熒光,而YAC-1細胞則未見熒光.RT-PCR分析證實轉染反義RNA後H22細胞中IL-1β錶達水平明顯下降,尤以IL-1β2反義RNA的阻斷效果更為顯著.結論 成功構建瞭小鼠IL-1β肝癌細胞特異性反義RNA錶達載體PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,兩裁體能有效地阻斷肝癌細胞中IL-1β的錶達.
목적 구건소서IL-1β반의RNA표체재체,관찰대간암세포중IL-1β표체적조단효과.방법 제취세포총RNA,RT-PCR확증IL-1β1화lL-1β2,장기반향련접도간암조직특이성표체재체PafpIRES2-EGFP,구건PafpIRES2-antiIL-1β1화PafpIRES2-antiIL-1β2반의RNA표체재체,이용jetPEI전염H22간암세포화YAC-1림파세포,형광현미경하관찰반의RNA재체적표체,RT-PCR방법분석H22세포중IL-1β표체수평적변화.결과 RT-PCR확증도량조장도분별위264화284bp적편단,여IL-1β1화IL-1β2상부,장기반향여PafpIRES2-EGFP련접,경균락PCR화DNA서렬분석증실,획득료PafplRES2-antiIL-1β1화PafpIRES2-antilL-1β2반의RNA표체재체.상술재체전염H22세포후,형광현미경하가견세포표체출명량록색형광,이YAC-1세포칙미견형광.RT-PCR분석증실전염반의RNA후H22세포중IL-1β표체수평명현하강,우이IL-1β2반의RNA적조단효과경위현저.결론 성공구건료소서IL-1β간암세포특이성반의RNA표체재체PafpIRES2-antiIL-1β1,PafpIRES2-antiIL-1β2,량재체능유효지조단간암세포중IL-1β적표체.
