广西医科大学学报
廣西醫科大學學報
엄서의과대학학보
JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY
2008年
2期
175-178
,共4页
尹永硕%肖强%谢玉波%李雷%王长青%唐振勇%马玉林%崔建华
尹永碩%肖彊%謝玉波%李雷%王長青%唐振勇%馬玉林%崔建華
윤영석%초강%사옥파%리뢰%왕장청%당진용%마옥림%최건화
RNA干扰%胃癌MGC803细胞%E2F-1%重组表达质粒
RNA榦擾%胃癌MGC803細胞%E2F-1%重組錶達質粒
RNA간우%위암MGC803세포%E2F-1%중조표체질립
目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响.方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接人经BamH I和Hind Ⅲ双酶切后的pSilencer4.1-CMV neo表达质粒,并做酶切及测序鉴定.用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-I mRNA及蛋白表达.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-l siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86.4%、86.1%和81,5%、79.6%.结论:pSilencer4.1一E2F-l重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础.
目的:通過構建人E2F-1基因的小榦擾RNA(siRNA)錶達質粒,探討其對胃癌MGC803細胞中E2F-1基因錶達的影響.方法:將設計閤成的具有短髮夾結構的人E2F-1基因siRNA寡覈苷痠鏈退火形成雙鏈,連接人經BamH I和Hind Ⅲ雙酶切後的pSilencer4.1-CMV neo錶達質粒,併做酶切及測序鑒定.用脂質體把重組質粒轉染至細胞,採用實時定量PCR(real-time quantitative PCR)及蛋白印跡(western blotting)技術分彆檢測E2F-I mRNA及蛋白錶達.結果:經酶切及測序鑒定,成功構建瞭E2F-l siRNA錶達質粒;它可顯著抑製MGC803細胞中E2F-1基因mRNA及蛋白錶達,與未轉染組及陰性對照組細胞比較,分彆降低瞭86.4%、86.1%和81,5%、79.6%.結論:pSilencer4.1一E2F-l重組質粒能抑製人胃癌MGC803細胞E2F-1基因的錶達,為進一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治療研究提供瞭實驗基礎.
목적:통과구건인E2F-1기인적소간우RNA(siRNA)표체질립,탐토기대위암MGC803세포중E2F-1기인표체적영향.방법:장설계합성적구유단발협결구적인E2F-1기인siRNA과핵감산련퇴화형성쌍련,련접인경BamH I화Hind Ⅲ쌍매절후적pSilencer4.1-CMV neo표체질립,병주매절급측서감정.용지질체파중조질립전염지세포,채용실시정량PCR(real-time quantitative PCR)급단백인적(western blotting)기술분별검측E2F-I mRNA급단백표체.결과:경매절급측서감정,성공구건료E2F-l siRNA표체질립;타가현저억제MGC803세포중E2F-1기인mRNA급단백표체,여미전염조급음성대조조세포비교,분별강저료86.4%、86.1%화81,5%、79.6%.결론:pSilencer4.1일E2F-l중조질립능억제인위암MGC803세포E2F-1기인적표체,위진일보E2F-1기인적공능연구급위암치료연구제공료실험기출.
