CAJ | 학술논문

背景与目的:高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)作为核DNA结合蛋白参与稳定染色质结构与功能和基因转录调控.近年研究发现,细胞内外HMGB1与多种肿瘤(例如,乳腺癌、结肠癌、黑素瘤)增殖和转移有密切关系,在多种实体瘤组织和未成熟细胞中表达丰富.本研究的目的是探讨转染HMGB1基因对阿霉素(adriamycin,ADM)诱导的白血病K562细胞凋亡的影响,旨在进一步阐明HMGB1在儿童白血病中的分子作用机制.方法:将HMGB1基因真核表达载体pcDNA3.1-HMGB1转染至K562细胞,构建HMGB1基因高表达的K562细胞.Western blot和RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain raction)法检测基因转染前后K562细胞中HMGB1蛋白及mRNA的表达水平;WST8法检测ADM对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测和计算凋亡细胞百分率;Westem blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达:采用Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-3和Caspase-9的活性.结果:与转染空载体的K562细胞相比,转染HMGB1基因的K562细胞HMGB1 mRNA表达水平增加85%,蛋白表达水平增加56%.HMGB1基因过表达降低了K562细胞对ADM的药物敏感性,使ADM的IC50从转染前的(0.06±0.00)p,g/mL增加到(3.46±0.06)μg/mL,并在ADM浓度为1 μg/mL时凋亡细胞百分率下降31%.HMGB1基因过表达抑制了ADM所致K562细胞Bcl-2蛋白表达水平下降.ADM处理细胞12 h和24 h后,转染HMGB1基因的K562细胞的Caspase-3和Caspase-9活化明显受到抑制(1.55±0.06 vs.2.55±0.06,1.86±0.10 vs.2.85±0.06;1.40±0.08 vs.2.03±0.05,1.55±0.06 vs.2.22±0.05,P值均≤0.05).结论:HMGB1高表达可通过调节Bcl-2蛋白水平和Caspase3及Caspase-9活性来抑制阿霉素诱导的白血病K562细胞凋亡.
배경여목적:고천이솔족단백1(high mobility group box 1,HMGB1)작위핵DNA결합단백삼여은정염색질결구여공능화기인전록조공.근년연구발현,세포내외HMGB1여다충종류(례여,유선암、결장암、흑소류)증식화전이유밀절관계,재다충실체류조직화미성숙세포중표체봉부.본연구적목적시탐토전염HMGB1기인대아매소(adriamycin,ADM)유도적백혈병K562세포조망적영향,지재진일보천명HMGB1재인동백혈병중적분자작용궤제.방법:장HMGB1기인진핵표체재체pcDNA3.1-HMGB1전염지K562세포,구건HMGB1기인고표체적K562세포.Western blot화RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain raction)법검측기인전염전후K562세포중HMGB1단백급mRNA적표체수평;WST8법검측ADM대전염전후세포적반수억제농도(IC50);류식세포의검측화계산조망세포백분솔;Westem blot검측항조망단백Bcl-2적단백표체:채용Caspase활성정량검측시제합분석Caspase-3화Caspase-9적활성.결과:여전염공재체적K562세포상비,전염HMGB1기인적K562세포HMGB1 mRNA표체수평증가85%,단백표체수평증가56%.HMGB1기인과표체강저료K562세포대ADM적약물민감성,사ADM적IC50종전염전적(0.06±0.00)p,g/mL증가도(3.46±0.06)μg/mL,병재ADM농도위1 μg/mL시조망세포백분솔하강31%.HMGB1기인과표체억제료ADM소치K562세포Bcl-2단백표체수평하강.ADM처리세포12 h화24 h후,전염HMGB1기인적K562세포적Caspase-3화Caspase-9활화명현수도억제(1.55±0.06 vs.2.55±0.06,1.86±0.10 vs.2.85±0.06;1.40±0.08 vs.2.03±0.05,1.55±0.06 vs.2.22±0.05,P치균≤0.05).결론:HMGB1고표체가통과조절Bcl-2단백수평화Caspase3급Caspase-9활성래억제아매소유도적백혈병K562세포조망.