辐射研究与辐射工艺学报
輻射研究與輻射工藝學報
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JOURNAL OF RADIATION RESEARCH AND RADIATION PROCESSING
2009年
3期
187-189
,共3页
wortmannin%辐射%NF-kB%凝胶迁移实验
wortmannin%輻射%NF-kB%凝膠遷移實驗
wortmannin%복사%NF-kB%응효천이실험
用凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究PI-3K的特异性抑制剂WORT-MANNIN(WT)影响细胞辐射反应与核因子NF-kB的关系.合成含kB位点的双链寡核苷酸碱基序列,以无菌双蒸水稀释,退火,制备放射性核苷酸探针.常规方法培养LP3细胞,实验LP3细胞样品受WT作用及5 Gyγ射线照射后,提取核蛋白,与标记探针进行结合反应,进行非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳.真空干胶,低温环境中进行放射自显影,照相扫描,进行转录因子的凝胶迁移率改变分析.未受WT作用的LP3细胞转录因子NF-kB结合活性在受5 Gyγ射线照后6 h内,经历从8%升高至50%然后降低至12%,50 μmol/L WT明显抑制了转录因子受照后的变化幅度.电离辐射可能通过一些信号传导途径激活NF-kB,进而促使一些与DNA损伤修复和细胞其它防御机制有关的基因活动,以减轻辐射损伤,WT有可能是通过阻滞这一过程的早期阶段而发生辐射增敏效应.
用凝膠遷移實驗(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究PI-3K的特異性抑製劑WORT-MANNIN(WT)影響細胞輻射反應與覈因子NF-kB的關繫.閤成含kB位點的雙鏈寡覈苷痠堿基序列,以無菌雙蒸水稀釋,退火,製備放射性覈苷痠探針.常規方法培養LP3細胞,實驗LP3細胞樣品受WT作用及5 Gyγ射線照射後,提取覈蛋白,與標記探針進行結閤反應,進行非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳.真空榦膠,低溫環境中進行放射自顯影,照相掃描,進行轉錄因子的凝膠遷移率改變分析.未受WT作用的LP3細胞轉錄因子NF-kB結閤活性在受5 Gyγ射線照後6 h內,經歷從8%升高至50%然後降低至12%,50 μmol/L WT明顯抑製瞭轉錄因子受照後的變化幅度.電離輻射可能通過一些信號傳導途徑激活NF-kB,進而促使一些與DNA損傷脩複和細胞其它防禦機製有關的基因活動,以減輕輻射損傷,WT有可能是通過阻滯這一過程的早期階段而髮生輻射增敏效應.
용응효천이실험(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)연구PI-3K적특이성억제제WORT-MANNIN(WT)영향세포복사반응여핵인자NF-kB적관계.합성함kB위점적쌍련과핵감산감기서렬,이무균쌍증수희석,퇴화,제비방사성핵감산탐침.상규방법배양LP3세포,실험LP3세포양품수WT작용급5 Gyγ사선조사후,제취핵단백,여표기탐침진행결합반응,진행비변성취병희선안응효전영.진공간효,저온배경중진행방사자현영,조상소묘,진행전록인자적응효천이솔개변분석.미수WT작용적LP3세포전록인자NF-kB결합활성재수5 Gyγ사선조후6 h내,경력종8%승고지50%연후강저지12%,50 μmol/L WT명현억제료전록인자수조후적변화폭도.전리복사가능통과일사신호전도도경격활NF-kB,진이촉사일사여DNA손상수복화세포기타방어궤제유관적기인활동,이감경복사손상,WT유가능시통과조체저일과정적조기계단이발생복사증민효응.
