重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
8期
1217-1220
,共4页
李晓清%杨国汉%李秀英%钟瑜%陈林%徐晓玉
李曉清%楊國漢%李秀英%鐘瑜%陳林%徐曉玉
리효청%양국한%리수영%종유%진림%서효옥
糖皮质激素受体(GR)%RNA干扰%Cre-loxP系统
糖皮質激素受體(GR)%RNA榦擾%Cre-loxP繫統
당피질격소수체(GR)%RNA간우%Cre-loxP계통
目的:应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)及Cre-loxP系统构建针对目的基因糖皮质激素受体(Glueocorticoid receptor,GR)表达抑制细胞模型.方法:设计并合成两对RNAi靶序列,连接至pBS/U6-Neo载体,联合应用Cre-loxP系统及RNAi构建针对目的基因GR的两对重组质粒,对构建的重组质粒采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)及测序的方法进行鉴定,将构建成功的重组质粒及Cre-ERT2质粒稳定共转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用半定量逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot的方法分别检测诱导RNAi表达后GR在mRNA及蛋白水平的表达情况.结果:构建的两个针对目的基因GR的重组质粒可显著降低GR在mRNA及蛋白水平的表达.结论:联合采用RNAi及Cre-loxP系统能可控的稳定降低小鼠巨噬细胞RAW264.7中的GR表达.
目的:應用RNA榦擾(RNA interference,RNAi)及Cre-loxP繫統構建針對目的基因糖皮質激素受體(Glueocorticoid receptor,GR)錶達抑製細胞模型.方法:設計併閤成兩對RNAi靶序列,連接至pBS/U6-Neo載體,聯閤應用Cre-loxP繫統及RNAi構建針對目的基因GR的兩對重組質粒,對構建的重組質粒採用聚閤酶鏈反應(Polymerase chain reaction,PCR)及測序的方法進行鑒定,將構建成功的重組質粒及Cre-ERT2質粒穩定共轉染小鼠巨噬細胞RAW264.7,採用半定量逆轉錄聚閤酶鏈反應(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blot的方法分彆檢測誘導RNAi錶達後GR在mRNA及蛋白水平的錶達情況.結果:構建的兩箇針對目的基因GR的重組質粒可顯著降低GR在mRNA及蛋白水平的錶達.結論:聯閤採用RNAi及Cre-loxP繫統能可控的穩定降低小鼠巨噬細胞RAW264.7中的GR錶達.
목적:응용RNA간우(RNA interference,RNAi)급Cre-loxP계통구건침대목적기인당피질격소수체(Glueocorticoid receptor,GR)표체억제세포모형.방법:설계병합성량대RNAi파서렬,련접지pBS/U6-Neo재체,연합응용Cre-loxP계통급RNAi구건침대목적기인GR적량대중조질립,대구건적중조질립채용취합매련반응(Polymerase chain reaction,PCR)급측서적방법진행감정,장구건성공적중조질립급Cre-ERT2질립은정공전염소서거서세포RAW264.7,채용반정량역전록취합매련반응(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)급Western blot적방법분별검측유도RNAi표체후GR재mRNA급단백수평적표체정황.결과:구건적량개침대목적기인GR적중조질립가현저강저GR재mRNA급단백수평적표체.결론:연합채용RNAi급Cre-loxP계통능가공적은정강저소서거서세포RAW264.7중적GR표체.
