临床肝胆病杂志
臨床肝膽病雜誌
림상간담병잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2011年
5期
533-537
,共5页
陈鹏%郑素军%王世美%张建军%邢欣悦%张莹%刘梅%段钟平
陳鵬%鄭素軍%王世美%張建軍%邢訢悅%張瑩%劉梅%段鐘平
진붕%정소군%왕세미%장건군%형흔열%장형%류매%단종평
SMAD3蛋白质%RNA干扰%RNA,小分子干扰%慢病毒属
SMAD3蛋白質%RNA榦擾%RNA,小分子榦擾%慢病毒屬
SMAD3단백질%RNA간우%RNA,소분자간우%만병독속
目的 设计并筛选针对大鼠Smad3基因的siRNA,构建靶向Smad3基因的shRNA重组慢病毒.方法 针对大鼠Smad3基因设计并合成6对siRNA(siRNA001～006)及1对无关对照siRNA,转染大鼠肝细胞株BRL-3A,应用Western Blot检测各siRNA对SMAD3蛋白表达的抑制作用,挑选抑制效率高的siRNA.依据所得的序列合成并克隆到pLL3.7载体中,与包装质粒pRSVrev、pMDLg-pRRE和VSV-G共转染293FT细胞获得靶向Smad3的慢病毒.通过流式细胞仪绿色荧光蛋白(GFP)荧光计数来检测病毒滴度.结果 Western Blot检测证实siRNA001、siRNA005、siRNA006对SMAD3蛋白表达的抑制作用明显,抑制率分别可达83.36%、86.99%及64.88%.而对照siRNA无明显作用.酶切和测序结果显示Smad3 shRNA及对照shRNA重组载体质粒pLL3.7shRNA构建成功.将构建的质粒进行慢病毒包装可产生有感染活性的慢病毒颗粒.结论 筛选出针对大鼠Smad3基因有明显抑制作用的3对siRNA,并成功构建表达相应shRNA的4种重组慢病毒,为研究调控Smad3的表达对肝再生或肝纤维化的影响提供了实验条件.
目的 設計併篩選針對大鼠Smad3基因的siRNA,構建靶嚮Smad3基因的shRNA重組慢病毒.方法 針對大鼠Smad3基因設計併閤成6對siRNA(siRNA001～006)及1對無關對照siRNA,轉染大鼠肝細胞株BRL-3A,應用Western Blot檢測各siRNA對SMAD3蛋白錶達的抑製作用,挑選抑製效率高的siRNA.依據所得的序列閤成併剋隆到pLL3.7載體中,與包裝質粒pRSVrev、pMDLg-pRRE和VSV-G共轉染293FT細胞穫得靶嚮Smad3的慢病毒.通過流式細胞儀綠色熒光蛋白(GFP)熒光計數來檢測病毒滴度.結果 Western Blot檢測證實siRNA001、siRNA005、siRNA006對SMAD3蛋白錶達的抑製作用明顯,抑製率分彆可達83.36%、86.99%及64.88%.而對照siRNA無明顯作用.酶切和測序結果顯示Smad3 shRNA及對照shRNA重組載體質粒pLL3.7shRNA構建成功.將構建的質粒進行慢病毒包裝可產生有感染活性的慢病毒顆粒.結論 篩選齣針對大鼠Smad3基因有明顯抑製作用的3對siRNA,併成功構建錶達相應shRNA的4種重組慢病毒,為研究調控Smad3的錶達對肝再生或肝纖維化的影響提供瞭實驗條件.
목적 설계병사선침대대서Smad3기인적siRNA,구건파향Smad3기인적shRNA중조만병독.방법 침대대서Smad3기인설계병합성6대siRNA(siRNA001～006)급1대무관대조siRNA,전염대서간세포주BRL-3A,응용Western Blot검측각siRNA대SMAD3단백표체적억제작용,도선억제효솔고적siRNA.의거소득적서렬합성병극륭도pLL3.7재체중,여포장질립pRSVrev、pMDLg-pRRE화VSV-G공전염293FT세포획득파향Smad3적만병독.통과류식세포의록색형광단백(GFP)형광계수래검측병독적도.결과 Western Blot검측증실siRNA001、siRNA005、siRNA006대SMAD3단백표체적억제작용명현,억제솔분별가체83.36%、86.99%급64.88%.이대조siRNA무명현작용.매절화측서결과현시Smad3 shRNA급대조shRNA중조재체질립pLL3.7shRNA구건성공.장구건적질립진행만병독포장가산생유감염활성적만병독과립.결론 사선출침대대서Smad3기인유명현억제작용적3대siRNA,병성공구건표체상응shRNA적4충중조만병독,위연구조공Smad3적표체대간재생혹간섬유화적영향제공료실험조건.
