中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
11期
1011-1015
,共5页
陈璐%吾拉木·马木提%陈洁%古力帕丽·麦曼提依明
陳璐%吾拉木·馬木提%陳潔%古力帕麗·麥曼提依明
진로%오랍목·마목제%진길%고력파려·맥만제의명
环介导等温扩增%棘球绦虫%Cox1基因%检测
環介導等溫擴增%棘毬縚蟲%Cox1基因%檢測
배개도등온확증%극구조충%Cox1기인%검측
目的 建立快速检测棘球绦虫感染犬粪便的DNA检测方法一环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP).方法 针对细粒棘球绦虫线粒体DNA Cox1基因6个位点特异性的设计4条LAMP引物,利用LAMP法和普通PCR方法同时检测棘球绦虫、肥胖带绦虫以及犬肠道内包括犬蛔虫和泡状带绦虫的DNA来验证LAMP方法的特异性；将转入Cox1基因片段的质粒作为标准阳性对照,并做系列10倍稀释同时用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者的敏感性.此外,运用LAMP法检测13份犬粪DNA样本.LAMP扩增结果通过肉眼、电泳和酶切来鉴定.结果 以棘球绦虫DNA为模板的反应体系出现LAMP扩增反应产物,其它寄生虫和肥胖带绦虫没有出现LAMP扩增反应产物.LAMP检测Cox1基因的敏感性比普通PCR高出10倍,用于8只人工感染的犬检测结果均为阳性,而5只健康犬为阴性.结论 初步建立一种特异、敏感检测棘球绦虫感染犬的快速检测方法,不需要PCR仪、凝胶成像仪等昂贵的设备和电泳观察步骤,适于包虫病流行区和基层动物医院棘球绦虫感染犬的检测.
目的 建立快速檢測棘毬縚蟲感染犬糞便的DNA檢測方法一環介導等溫擴增技術(loop-mediated isothermal amplification.LAMP).方法 針對細粒棘毬縚蟲線粒體DNA Cox1基因6箇位點特異性的設計4條LAMP引物,利用LAMP法和普通PCR方法同時檢測棘毬縚蟲、肥胖帶縚蟲以及犬腸道內包括犬蛔蟲和泡狀帶縚蟲的DNA來驗證LAMP方法的特異性；將轉入Cox1基因片段的質粒作為標準暘性對照,併做繫列10倍稀釋同時用LAMP和PCR方法進行檢測來比較兩者的敏感性.此外,運用LAMP法檢測13份犬糞DNA樣本.LAMP擴增結果通過肉眼、電泳和酶切來鑒定.結果 以棘毬縚蟲DNA為模闆的反應體繫齣現LAMP擴增反應產物,其它寄生蟲和肥胖帶縚蟲沒有齣現LAMP擴增反應產物.LAMP檢測Cox1基因的敏感性比普通PCR高齣10倍,用于8隻人工感染的犬檢測結果均為暘性,而5隻健康犬為陰性.結論 初步建立一種特異、敏感檢測棘毬縚蟲感染犬的快速檢測方法,不需要PCR儀、凝膠成像儀等昂貴的設備和電泳觀察步驟,適于包蟲病流行區和基層動物醫院棘毬縚蟲感染犬的檢測.
목적 건립쾌속검측극구조충감염견분편적DNA검측방법일배개도등온확증기술(loop-mediated isothermal amplification.LAMP).방법 침대세립극구조충선립체DNA Cox1기인6개위점특이성적설계4조LAMP인물,이용LAMP법화보통PCR방법동시검측극구조충、비반대조충이급견장도내포괄견회충화포상대조충적DNA래험증LAMP방법적특이성；장전입Cox1기인편단적질립작위표준양성대조,병주계렬10배희석동시용LAMP화PCR방법진행검측래비교량자적민감성.차외,운용LAMP법검측13빈견분DNA양본.LAMP확증결과통과육안、전영화매절래감정.결과 이극구조충DNA위모판적반응체계출현LAMP확증반응산물,기타기생충화비반대조충몰유출현LAMP확증반응산물.LAMP검측Cox1기인적민감성비보통PCR고출10배,용우8지인공감염적견검측결과균위양성,이5지건강견위음성.결론 초보건립일충특이、민감검측극구조충감염견적쾌속검측방법,불수요PCR의、응효성상의등앙귀적설비화전영관찰보취,괄우포충병류행구화기층동물의원극구조충감염견적검측.
