CAJ | 학술논문

目的建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测.方法针对8种细菌(沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHECO157:H7、奇异变形杆菌、霍乱弧菌和单增李斯特菌)和2种病毒(Norwalk病毒和轮状病毒)分别建立LAMP和RT-LAMP方法,分别对25种常见肠道细菌和病毒进行LAMP扩增,水浴箱内65℃扩增60 min(LAMP)或120 min(RT-LAMP),扩增完成后利用电泳和肉眼进行结果判断.对365份食源性疾病患者呕吐物、肛拭子和食品等标本进行10种食源性疾病病原体LAMP分子检测.结果 10种食源性疾病病原体LAMP或RT-LAMP方法均只对靶病原体出现阳性结果,电泳显示为LAMP特异性梯状条带,加SYBRGreenⅠ后肉眼观察反应液变为绿色;8种细菌性病原体LAMP检测方法的敏感度为3×100～1.2×102 cfu/ml,其中6种LAMP方法敏感度高于PCR方法,其他病原体(霍乱弧菌、EHEC O157:H7、Norwalk病毒和轮状病毒)敏感度与PCR方法相同.从365份标本中检出沙门菌属11份、志贺菌属6份、金黄色葡萄球菌13份、EHEC O157:H7 2份、副溶血性弧菌2份、单增李斯特菌2份、Norwalk病毒12份和轮状病毒7份.结论建立了一个较为完整的LAMP分子鉴别检测体系,可以在一台水浴箱内同时对10种食源性疾病病原体进行高通量的分子鉴别检测,具有快速、不需要特殊仪器和肉眼判断结果的优势,适合基层单位的实验室开展食源性疾病的分子鉴别诊断.
목적 건립일충LAMP분자감별검측체계,응용우10충식원성질병병원체적분자감별검측.방법 침대8충세균(사문균속、지하균속、금황색포도구균、부용혈성호균、EHECO157:H7、기이변형간균、곽란호균화단증리사특균)화2충병독(Norwalk병독화륜상병독)분별건립LAMP화RT-LAMP방법,분별대25충상견장도세균화병독진행LAMP확증,수욕상내65℃확증60 min(LAMP)혹120 min(RT-LAMP),확증완성후이용전영화육안진행결과판단.대365빈식원성질병환자구토물、항식자화식품등표본진행10충식원성질병병원체LAMP분자검측.결과 10충식원성질병병원체LAMP혹RT-LAMP방법균지대파병원체출현양성결과,전영현시위LAMP특이성제상조대,가SYBRGreenⅠ후육안관찰반응액변위록색;8충세균성병원체LAMP검측방법적민감도위3×100～1.2×102 cfu/ml,기중6충LAMP방법민감도고우PCR방법,기타병원체(곽란호균、EHEC O157:H7、Norwalk병독화륜상병독)민감도여PCR방법상동.종365빈표본중검출사문균속11빈、지하균속6빈、금황색포도구균13빈、EHEC O157:H7 2빈、부용혈성호균2빈、단증리사특균2빈、Norwalk병독12빈화륜상병독7빈.결론 건립료일개교위완정적LAMP분자감별검측체계,가이재일태수욕상내동시대10충식원성질병병원체진행고통량적분자감별검측,구유쾌속、불수요특수의기화육안판단결과적우세,괄합기층단위적실험실개전식원성질병적분자감별진단.