人端粒酶逆转录酶基因转染人髓核细胞的安全性研究
인단립매역전록매기인전염인수핵세포적안전성연구
Safety study of human nucleus pulposus cells transfered by human telomerase reverse transcriptase gene
  • 万方数据
    脊柱外科杂志 척주외과잡지
    JOURNAL OF SPINE SURGERY
    2012年 3期 181-185 ,共5页

    吴剑宏%阮狄克%王德利%张超%何勍%王超锋%张燕%辛洪奎%顾韬%徐成%刘玥

    오검굉%원적극%왕덕리%장초%하경%왕초봉%장연%신홍규%고도%서성%류모

    端粒,末端转移酶%腺病毒科%骨髓细胞%基因疗法%致癌性试验 耑粒,末耑轉移酶%腺病毒科%骨髓細胞%基因療法%緻癌性試驗
    단립,말단전이매%선병독과%골수세포%기인요법%치암성시험
    目的 评价人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因转染对人椎间盘髓核细胞“安全性”的影响.方法 将构建好的重组腺相关病毒人端粒酶逆转录酶基因( recombinant adeno-associated virus vector-mediated hTERT gene,rAAV-hTERT)按感染复数(multiplicity of infection,MOI) 105 v.g每细胞转染体外培养二代髓核细胞.设立rAAV-hTERT转染组,AAV空病毒转染组及未转染组;利用RT-PCR及Western-blot检测转染后hTERT基因的表达;对体外培养120 d的细胞进行染色体核型分析;将3组细胞(100 μL,3×107/mL)分别注入裸鼠腋下检测其成瘤性,以人Hela细胞为阳性成瘤实验对照.结果 成功检测出rAAV-hTERT转染髓核细胞后hTERT基因的表达;G-带核型分析未见染色体结构异常克隆;3组细胞均未观察到裸鼠体内肿瘤形成.结论 rAAV-hTERT能成功转染人椎间盘髓核细胞并正确表达,rAAV-hTERT转染髓核细胞在有限的体外培养过程中是安全的,可为进一步的在体研究提供安全性证据.
    목적 평개인단립매역전록매(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)기인전염대인추간반수핵세포“안전성”적영향.방법 장구건호적중조선상관병독인단립매역전록매기인( recombinant adeno-associated virus vector-mediated hTERT gene,rAAV-hTERT)안감염복수(multiplicity of infection,MOI) 105 v.g매세포전염체외배양이대수핵세포.설립rAAV-hTERT전염조,AAV공병독전염조급미전염조;이용RT-PCR급Western-blot검측전염후hTERT기인적표체;대체외배양120 d적세포진행염색체핵형분석;장3조세포(100 μL,3×107/mL)분별주입라서액하검측기성류성,이인Hela세포위양성성류실험대조.결과 성공검측출rAAV-hTERT전염수핵세포후hTERT기인적표체;G-대핵형분석미견염색체결구이상극륭;3조세포균미관찰도라서체내종류형성.결론 rAAV-hTERT능성공전염인추간반수핵세포병정학표체,rAAV-hTERT전염수핵세포재유한적체외배양과정중시안전적,가위진일보적재체연구제공안전성증거.
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