CAJ | 학술논문

目的: 应用耐热碱性磷酸酶(AKP)于微孔板DNA-DNA杂交技术,建立高G+C含量细菌染色体DNA同源性测定的特异性方法,为此类细菌的分类与鉴定奠定基础.方法:细菌染色体DNA经分离纯化并变性后,直接非共价结合于固相微孔板中,与标有光标生物素的DNA探针进行杂交.借助抗生物素蛋白与生物素的特异性结合,通过与板上带有生物素的杂交体作用,使得链霉亲和素连接的耐热AKP固定于板上,根据底物加入后的酶促反应强度,定量判读杂交结果.结果: 微孔板中1 μg/孔DNA的包被浓度与25～50 ng/孔的生物素探针呈现较为理想的杂交结果,pH 9.5 Tris-Hcl缓冲液系耐热AKP的最佳作用条件.应用该法于高G+C含量的分枝杆菌种间染色体同源性分析表明,方法具有敏感、特异、简便等优点. 结论: 耐热AKP应用于微孔板定量杂交,可不受较高杂交和测定温度的影响,适用于高G+C含量的结核杆菌等分枝杆菌属以及假单胞菌属的定性检测和同源性的定量分析.
목적: 응용내열감성린산매(AKP)우미공판DNA-DNA잡교기술,건립고G+C함량세균염색체DNA동원성측정적특이성방법,위차류세균적분류여감정전정기출.방법:세균염색체DNA경분리순화병변성후,직접비공개결합우고상미공판중,여표유광표생물소적DNA탐침진행잡교.차조항생물소단백여생물소적특이성결합,통과여판상대유생물소적잡교체작용,사득련매친화소련접적내열AKP고정우판상,근거저물가입후적매촉반응강도,정량판독잡교결과.결과: 미공판중1 μg/공DNA적포피농도여25～50 ng/공적생물소탐침정현교위이상적잡교결과,pH 9.5 Tris-Hcl완충액계내열AKP적최가작용조건.응용해법우고G+C함량적분지간균충간염색체동원성분석표명,방법구유민감、특이、간편등우점. 결론: 내열AKP응용우미공판정량잡교,가불수교고잡교화측정온도적영향,괄용우고G+C함량적결핵간균등분지간균속이급가단포균속적정성검측화동원성적정량분석.