中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2005年
1期
39-44
,共6页
刘君梁%刁建波%唐建洲%谢锦云%梁宋平
劉君樑%刁建波%唐建洲%謝錦雲%樑宋平
류군량%조건파%당건주%사금운%량송평
虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ%pMAL-p2X%凝血酶%胰蛋白酶抑制剂
虎紋捕鳥蛛毒素Ⅺ%pMAL-p2X%凝血酶%胰蛋白酶抑製劑
호문포조주독소Ⅺ%pMAL-p2X%응혈매%이단백매억제제
虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ基因通过PCR扩增,插入pMAL-p2X载体,基因5'端插入凝血酶切割位点.在大肠杆菌中经IPTG诱导高效分泌表达.表达产物N端含麦芽糖结合蛋白,融合蛋白被分泌到大肠杆菌的胞间质.经冷渗透休克后,透析脱盐,用凝血酶切割融合蛋白,再经SuperdexTM75分子筛柱层析、高效液相色谱反相C18柱纯化,得到重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅺ.质谱分析表明,rHWTX-Ⅺ系正确表达产物,重组HWTX-Ⅺ表现出与天然HWTX-Ⅺ一致的生物学活性.
虎紋捕鳥蛛毒素Ⅺ基因通過PCR擴增,插入pMAL-p2X載體,基因5'耑插入凝血酶切割位點.在大腸桿菌中經IPTG誘導高效分泌錶達.錶達產物N耑含麥芽糖結閤蛋白,融閤蛋白被分泌到大腸桿菌的胞間質.經冷滲透休剋後,透析脫鹽,用凝血酶切割融閤蛋白,再經SuperdexTM75分子篩柱層析、高效液相色譜反相C18柱純化,得到重組虎紋捕鳥蛛毒素Ⅺ.質譜分析錶明,rHWTX-Ⅺ繫正確錶達產物,重組HWTX-Ⅺ錶現齣與天然HWTX-Ⅺ一緻的生物學活性.
호문포조주독소Ⅺ기인통과PCR확증,삽입pMAL-p2X재체,기인5'단삽입응혈매절할위점.재대장간균중경IPTG유도고효분비표체.표체산물N단함맥아당결합단백,융합단백피분비도대장간균적포간질.경랭삼투휴극후,투석탈염,용응혈매절할융합단백,재경SuperdexTM75분자사주층석、고효액상색보반상C18주순화,득도중조호문포조주독소Ⅺ.질보분석표명,rHWTX-Ⅺ계정학표체산물,중조HWTX-Ⅺ표현출여천연HWTX-Ⅺ일치적생물학활성.
