CAJ | 학술논문

目的构建融合基因IFN-α1b/CSPⅡ的原核表达载体并予以表达. 方法采用聚合酶链反应(PCR)从人基因组DNA中扩增出IFN-α1b基因, 克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 构建原核表达载体pGEX-4T-1/IFN-α1b.利用PCR法从恶性疟原虫基因组DNA中扩增出环子孢子蛋白Ⅱ区(CSPⅡ)基因, 克隆入原核表达载体pGEX-4T-1, 构建原核表达载体 pGEX-4T-1/CSPⅡ . 用限制性内切酶 BamHⅠ和 EcoRⅠ将IFN-α1b从原核重组质粒pGEX-4T-1/IFN-α1b中切下, 克隆入经相同酶切的原核重组质粒 pGEX-4T-1/CSPⅡ中, 构建融合基因的原核表达载体pGEX-4T-1/IFN- α1b/CSPⅡ .融合基因IFN-α1b/CSPⅡ经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导, 在大肠埃希菌中进行初步表达. 结果构建的原核表达载体pGEX-4T-1/IFN-α1b、pGEX-4T-1/CSPⅡ和pGEX-4T-1/IFN-α1b/CSPⅡ经PCR和酶切鉴定与预期结果一致. 证实融合基因IFN-α1b/CSPⅡ拼接成功并正确地克隆入原核表达载体.在大肠埃希菌中表达出融合蛋白IFN-α1b/CSPⅡ, 该融合蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析与理论预测值相符. 经蛋白质印迹法(Western blotting)鉴定具有免疫原性. 结论构建了融合基因IFN-α1b/CSPⅡ的原核表达载体, 并在大肠埃希菌中表达了融合蛋白 IFN-α1b/CSPⅡ.
목적구건융합기인IFN-α1b/CSPⅡ적원핵표체재체병여이표체. 방법채용취합매련반응(PCR)종인기인조DNA중확증출IFN-α1b기인, 극륭입원핵표체재체pGEX-4T-1, 구건원핵표체재체pGEX-4T-1/IFN-α1b.이용PCR법종악성학원충기인조DNA중확증출배자포자단백Ⅱ구(CSPⅡ)기인, 극륭입원핵표체재체pGEX-4T-1, 구건원핵표체재체 pGEX-4T-1/CSPⅡ . 용한제성내절매 BamHⅠ화 EcoRⅠ장IFN-α1b종원핵중조질립pGEX-4T-1/IFN-α1b중절하, 극륭입경상동매절적원핵중조질립 pGEX-4T-1/CSPⅡ중, 구건융합기인적원핵표체재체pGEX-4T-1/IFN- α1b/CSPⅡ .융합기인IFN-α1b/CSPⅡ경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도, 재대장애희균중진행초보표체. 결과구건적원핵표체재체pGEX-4T-1/IFN-α1b、pGEX-4T-1/CSPⅡ화pGEX-4T-1/IFN-α1b/CSPⅡ경PCR화매절감정여예기결과일치. 증실융합기인IFN-α1b/CSPⅡ병접성공병정학지극륭입원핵표체재체.재대장애희균중표체출융합단백IFN-α1b/CSPⅡ, 해융합단백경십이완기광산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석여이론예측치상부. 경단백질인적법(Western blotting)감정구유면역원성. 결론구건료융합기인IFN-α1b/CSPⅡ적원핵표체재체, 병재대장애희균중표체료융합단백 IFN-α1b/CSPⅡ.