CAJ | 학술논문

目的构建pQE-hishbFGF表达载体,通过一步纯化得到6×HishbFGF蛋白质.方法用PCR扩增目的基因hbFGF,连接到pQEA0载体上,转化到Top10菌株筛选重组子,经测序后将质粒转化到表达菌M15上,经IPTG诱导表达,超声波破菌后通过镍离子螯合层析一步纯化得6×HishbFGF蛋白质,ELISA鉴定产物,用MTT法检测产物促细胞增殖的生物活性.结果hbFGF基因插入pQE载体中,在M15中6×HishbFGF的表达量达到20%,且为可溶性表达.经一步纯化后得到N端带6个组氨酸的hbFGF蛋白,纯度为96%,6×HishbFGF具有免疫原性及促进NIH3T3细胞增殖的活性.结论6×HishbFGF蛋白质在M15中可溶性地高效表达,并经一步亲和层析得到纯度高活性高的产物,降低了生产成本,为大规模生产hbFGF及hbFGF的应用研究奠定了基础.
목적구건pQE-hishbFGF표체재체,통과일보순화득도6×HishbFGF단백질.방법용PCR확증목적기인hbFGF,련접도pQEA0재체상,전화도Top10균주사선중조자,경측서후장질립전화도표체균M15상,경IPTG유도표체,초성파파균후통과얼리자오합층석일보순화득6×HishbFGF단백질,ELISA감정산물,용MTT법검측산물촉세포증식적생물활성.결과hbFGF기인삽입pQE재체중,재M15중6×HishbFGF적표체량체도20%,차위가용성표체.경일보순화후득도N단대6개조안산적hbFGF단백,순도위96%,6×HishbFGF구유면역원성급촉진NIH3T3세포증식적활성.결론6×HishbFGF단백질재M15중가용성지고효표체,병경일보친화층석득도순도고활성고적산물,강저료생산성본,위대규모생산hbFGF급hbFGF적응용연구전정료기출.