实验生物学报
實驗生物學報
실험생물학보
ACTA BIOLOGIAE EXPERIMENTLIS SINICA
2005年
6期
536-544
,共9页
林蓓%齐藤 真木子%岩森正男
林蓓%齊籐 真木子%巖森正男
림배%제등 진목자%암삼정남
α1%2-岩藻糖基转移酶%基因%克隆%表达%小鼠
α1%2-巖藻糖基轉移酶%基因%剋隆%錶達%小鼠
α1%2-암조당기전이매%기인%극륭%표체%소서
本文报告小鼠GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)基因的克隆,并进行功能鉴定.利用RT-PCR方法克隆小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因编码区MFUT-Ⅱ,测序后将其插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ;采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过对底物特异性比较研究酶的性质;应用Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况;应用Southern印迹杂交法分析基因存在状态.结果证实MFUT-Ⅱ为小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因家族的新成员,含有一个完整的开放读码框,可编码347个氨基酸,其估计分子质量为39 kDa,和小鼠H及Secl基因具有序列同源性,分别与人类Se基因(79.0%)、大鼠Rat FTB(89%)基因、兔Rabbit FT-Ⅲ基因(77%)具有较高的序列同源性.用MFUT-Ⅱ基因转染的COS-7细胞具有α1,2-FT活性,MFUT-Ⅱ可在多种组织中产生3.5kb大小的mRNA转录产物.基因Southern印迹杂交分析结果显示:基因MFUT-Ⅱ仅为一个拷贝.这些结果证明MFUT-Ⅱ为小鼠的Se基因.
本文報告小鼠GDP巖藻糖:β半乳糖苷α1,2-巖藻糖基轉移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)基因的剋隆,併進行功能鑒定.利用RT-PCR方法剋隆小鼠α1,2-巖藻糖基轉移酶基因編碼區MFUT-Ⅱ,測序後將其插入錶達載體pcDNA3.1的多剋隆位點,構建錶達載體pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ;採用燐痠鈣法將其轉染于COS-7細胞進行錶達,通過對底物特異性比較研究酶的性質;應用Northern印跡雜交法研究基因在小鼠組織中的錶達情況;應用Southern印跡雜交法分析基因存在狀態.結果證實MFUT-Ⅱ為小鼠α1,2-巖藻糖基轉移酶基因傢族的新成員,含有一箇完整的開放讀碼框,可編碼347箇氨基痠,其估計分子質量為39 kDa,和小鼠H及Secl基因具有序列同源性,分彆與人類Se基因(79.0%)、大鼠Rat FTB(89%)基因、兔Rabbit FT-Ⅲ基因(77%)具有較高的序列同源性.用MFUT-Ⅱ基因轉染的COS-7細胞具有α1,2-FT活性,MFUT-Ⅱ可在多種組織中產生3.5kb大小的mRNA轉錄產物.基因Southern印跡雜交分析結果顯示:基因MFUT-Ⅱ僅為一箇拷貝.這些結果證明MFUT-Ⅱ為小鼠的Se基因.
본문보고소서GDP암조당:β반유당감α1,2-암조당기전이매(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)기인적극륭,병진행공능감정.이용RT-PCR방법극륭소서α1,2-암조당기전이매기인편마구MFUT-Ⅱ,측서후장기삽입표체재체pcDNA3.1적다극륭위점,구건표체재체pcDNA3.1-MFUT-Ⅱ;채용린산개법장기전염우COS-7세포진행표체,통과대저물특이성비교연구매적성질;응용Northern인적잡교법연구기인재소서조직중적표체정황;응용Southern인적잡교법분석기인존재상태.결과증실MFUT-Ⅱ위소서α1,2-암조당기전이매기인가족적신성원,함유일개완정적개방독마광,가편마347개안기산,기고계분자질량위39 kDa,화소서H급Secl기인구유서렬동원성,분별여인류Se기인(79.0%)、대서Rat FTB(89%)기인、토Rabbit FT-Ⅲ기인(77%)구유교고적서렬동원성.용MFUT-Ⅱ기인전염적COS-7세포구유α1,2-FT활성,MFUT-Ⅱ가재다충조직중산생3.5kb대소적mRNA전록산물.기인Southern인적잡교분석결과현시:기인MFUT-Ⅱ부위일개고패.저사결과증명MFUT-Ⅱ위소서적Se기인.
