中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
8期
770-773
,共4页
日本血吸虫%日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶%蛋白表达%正交设计%大肠杆菌
日本血吸蟲%日本血吸蟲穀胱甘肽S-轉移酶%蛋白錶達%正交設計%大腸桿菌
일본혈흡충%일본혈흡충곡광감태S-전이매%단백표체%정교설계%대장간균
目的 探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件.方法 用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的密度和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件并大量表达,采用谷胱甘肽亲和层析法纯化表达的蛋白,测定酶活性,通过Western blot鉴定免疫活性.结果 正交设计的直观分析和方差分析结果显示:可溶性rSj26 GST最佳表达条件为温度25 ℃,IPTG的浓度1 mmol/L,诱导前细菌的生长密度0.9,诱导表达时间8 h.可溶性rSj26 GST纯化的产量为16 mg/L,Western blot证实rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反应性.结论 通过正交设计确定了可溶性rSj26 GST在大肠杆菌中表达的优化条件.
目的 探討在大腸桿菌中錶達可溶性重組日本血吸蟲穀胱甘肽S-轉移酶(rSj26 GST)的優化條件.方法 用含有Sj26基因的原覈錶達載體pGEX-3X轉化大腸桿菌BL21(DE3),將影響可溶性rSj26 GST錶達的4箇因素,即溫度、誘導劑IPTG濃度、誘導時細菌的密度和誘導時間進行正交設計,確定其優化錶達條件併大量錶達,採用穀胱甘肽親和層析法純化錶達的蛋白,測定酶活性,通過Western blot鑒定免疫活性.結果 正交設計的直觀分析和方差分析結果顯示:可溶性rSj26 GST最佳錶達條件為溫度25 ℃,IPTG的濃度1 mmol/L,誘導前細菌的生長密度0.9,誘導錶達時間8 h.可溶性rSj26 GST純化的產量為16 mg/L,Western blot證實rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反應性.結論 通過正交設計確定瞭可溶性rSj26 GST在大腸桿菌中錶達的優化條件.
목적 탐토재대장간균중표체가용성중조일본혈흡충곡광감태S-전이매(rSj26 GST)적우화조건.방법 용함유Sj26기인적원핵표체재체pGEX-3X전화대장간균BL21(DE3),장영향가용성rSj26 GST표체적4개인소,즉온도、유도제IPTG농도、유도시세균적밀도화유도시간진행정교설계,학정기우화표체조건병대량표체,채용곡광감태친화층석법순화표체적단백,측정매활성,통과Western blot감정면역활성.결과 정교설계적직관분석화방차분석결과현시:가용성rSj26 GST최가표체조건위온도25 ℃,IPTG적농도1 mmol/L,유도전세균적생장밀도0.9,유도표체시간8 h.가용성rSj26 GST순화적산량위16 mg/L,Western blot증실rSj26 GST구유량호면역원성화면역반응성.결론 통과정교설계학정료가용성rSj26 GST재대장간균중표체적우화조건.
