CAJ | 학술논문

目的:研究神经干细胞的增殖、迁移和分化可为揭示神经系统的发生、发育过程提供可靠依据.观察表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外刺激新生鼠基底前脑神经干细胞的增殖情况,及其各自诱导神经干细胞分化成神经元的能力.方法:实验于2005-12/2006-07在广州医学院解剖学教研室完成.①动物:清洁级新生24 h内的SD大鼠30只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:新生鼠在无菌条件下取脑,分离出基底前脑,胰蛋白酶消化,离心过滤制备单细胞悬液,接种于含B27的DMEM/F12培养基培养瓶中,每瓶40～60万个细胞,加入终浓度均为10μg/L的表皮生长因子和碱性成纤维生长因子刺激生长,在体外进行神经干细胞的克隆培养,传代培养过程中加入终浓度为6 mg/L BrdU用于标记神经球,设立3组,各自加入体积分数为0.1的小牛血清、终浓度均为10μg/L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子,对培养得到的神经干细胞进行诱导分化.③实验评估:免疫荧光染色检测神经干细胞巢蛋白抗原的表达,并用BrdU标记和免疫荧光证实其增殖能力.免疫荧光染色检测不同诱导条件下神经干细胞向神经元分化的能力. 结果:①细胞形态观察:从新生鼠基底前脑成功分离出神经干细胞,原代培养呈透亮的圆球形,2～3 d后细胞数目明显减少,部分细胞开始分裂.1周左右培养瓶中出现许多由数十到数百个细胞组成的悬浮生长的细胞球,球中的细胞形态规则,边界清楚,折光性较强,胞浆颜色较深,核/浆比较大.该细胞具有连续增殖能力,可以传代培养.②巢蛋白抗原的表达:传代神经球中的细胞均呈巢蛋白抗原阳性.③BrdU标记检测:克隆球中的细胞均为BrdU阳性,表明克隆球是由不断分裂增殖的细胞组成.④诱导分化结果:在体积分数为0.1小牛血清、终浓度均为10μg/L的表皮生长因子、碱性成纤维生长因子诱导条件下,神经干细胞分化为神经元的比例分别为20%,22%,40%.结论:①表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在体外能够刺激新生鼠基底前脑神经干细胞连续增殖,且具有胚胎源性.②以血清作为对照,碱性成纤维生长因子诱导神经干细胞向神经元分化的能力强于表皮生长因子. 目的:研究神經榦細胞的增殖、遷移和分化可為揭示神經繫統的髮生、髮育過程提供可靠依據.觀察錶皮生長因子和堿性成纖維生長因子在體外刺激新生鼠基底前腦神經榦細胞的增殖情況,及其各自誘導神經榦細胞分化成神經元的能力.方法:實驗于2005-12/2006-07在廣州醫學院解剖學教研室完成.①動物:清潔級新生24 h內的SD大鼠30隻,實驗過程中對動物的處置符閤動物倫理學標準.②實驗方法:新生鼠在無菌條件下取腦,分離齣基底前腦,胰蛋白酶消化,離心過濾製備單細胞懸液,接種于含B27的DMEM/F12培養基培養瓶中,每瓶40～60萬箇細胞,加入終濃度均為10μg/L的錶皮生長因子和堿性成纖維生長因子刺激生長,在體外進行神經榦細胞的剋隆培養,傳代培養過程中加入終濃度為6 mg/L BrdU用于標記神經毬,設立3組,各自加入體積分數為0.1的小牛血清、終濃度均為10μg/L的錶皮生長因子、堿性成纖維生長因子,對培養得到的神經榦細胞進行誘導分化.③實驗評估:免疫熒光染色檢測神經榦細胞巢蛋白抗原的錶達,併用BrdU標記和免疫熒光證實其增殖能力.免疫熒光染色檢測不同誘導條件下神經榦細胞嚮神經元分化的能力. 結果:①細胞形態觀察:從新生鼠基底前腦成功分離齣神經榦細胞,原代培養呈透亮的圓毬形,2～3 d後細胞數目明顯減少,部分細胞開始分裂.1週左右培養瓶中齣現許多由數十到數百箇細胞組成的懸浮生長的細胞毬,毬中的細胞形態規則,邊界清楚,摺光性較彊,胞漿顏色較深,覈/漿比較大.該細胞具有連續增殖能力,可以傳代培養.②巢蛋白抗原的錶達:傳代神經毬中的細胞均呈巢蛋白抗原暘性.③BrdU標記檢測:剋隆毬中的細胞均為BrdU暘性,錶明剋隆毬是由不斷分裂增殖的細胞組成.④誘導分化結果:在體積分數為0.1小牛血清、終濃度均為10μg/L的錶皮生長因子、堿性成纖維生長因子誘導條件下,神經榦細胞分化為神經元的比例分彆為20%,22%,40%.結論:①錶皮生長因子和堿性成纖維生長因子在體外能夠刺激新生鼠基底前腦神經榦細胞連續增殖,且具有胚胎源性.②以血清作為對照,堿性成纖維生長因子誘導神經榦細胞嚮神經元分化的能力彊于錶皮生長因子.
목적:연구신경간세포적증식、천이화분화가위게시신경계통적발생、발육과정제공가고의거.관찰표피생장인자화감성성섬유생장인자재체외자격신생서기저전뇌신경간세포적증식정황,급기각자유도신경간세포분화성신경원적능력.방법:실험우2005-12/2006-07재엄주의학원해부학교연실완성.①동물:청길급신생24 h내적SD대서30지,실험과정중대동물적처치부합동물윤리학표준.②실험방법:신생서재무균조건하취뇌,분리출기저전뇌,이단백매소화,리심과려제비단세포현액,접충우함B27적DMEM/F12배양기배양병중,매병40～60만개세포,가입종농도균위10μg/L적표피생장인자화감성성섬유생장인자자격생장,재체외진행신경간세포적극륭배양,전대배양과정중가입종농도위6 mg/L BrdU용우표기신경구,설립3조,각자가입체적분수위0.1적소우혈청、종농도균위10μg/L적표피생장인자、감성성섬유생장인자,대배양득도적신경간세포진행유도분화.③실험평고:면역형광염색검측신경간세포소단백항원적표체,병용BrdU표기화면역형광증실기증식능력.면역형광염색검측불동유도조건하신경간세포향신경원분화적능력. 결과:①세포형태관찰:종신생서기저전뇌성공분리출신경간세포,원대배양정투량적원구형,2～3 d후세포수목명현감소,부분세포개시분렬.1주좌우배양병중출현허다유수십도수백개세포조성적현부생장적세포구,구중적세포형태규칙,변계청초,절광성교강,포장안색교심,핵/장비교대.해세포구유련속증식능력,가이전대배양.②소단백항원적표체:전대신경구중적세포균정소단백항원양성.③BrdU표기검측:극륭구중적세포균위BrdU양성,표명극륭구시유불단분렬증식적세포조성.④유도분화결과:재체적분수위0.1소우혈청、종농도균위10μg/L적표피생장인자、감성성섬유생장인자유도조건하,신경간세포분화위신경원적비례분별위20%,22%,40%.결론:①표피생장인자화감성성섬유생장인자재체외능구자격신생서기저전뇌신경간세포련속증식,차구유배태원성.②이혈청작위대조,감성성섬유생장인자유도신경간세포향신경원분화적능력강우표피생장인자.