福建林学院学报
福建林學院學報
복건림학원학보
JOURNAL OF FUJIAN COLLEGE OF FORESTRY
2009年
2期
144-148
,共5页
黄宇%陈礼光%夏海涛%荣俊冬%孔玲%廖鹏辉%郑郁善
黃宇%陳禮光%夏海濤%榮俊鼕%孔玲%廖鵬輝%鄭鬱善
황우%진례광%하해도%영준동%공령%료붕휘%정욱선
福建含笑%ISSR-PCR%体系优化
福建含笑%ISSR-PCR%體繫優化
복건함소%ISSR-PCR%체계우화
以福建含笑叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,如dNTPs浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量以及退火温度等指标进行筛选和优化,确立了可用于福建含笑ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件:20 μL PCR反应体积中含0.4 mmol*L-1dNTPs,2.5 mmol*L-1 Mg\+\{2+\},1.5 U Taq DNA聚合酶,0.6 μmol*μL-1引物,30 ng模板DNA.PCR扩增程序:94 ℃预变性2 min,94 ℃变性30 s,47.3 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,45个循环,72 ℃延伸7 min,4 ℃保存.应用ISSR体系对5份福建含笑种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.
以福建含笑葉片提取的基因組DNA為材料,對影響ISSR-PCR擴增效果的一些因素,如dNTPs濃度、Mg2+濃度、Taq DNA聚閤酶用量、引物用量、模闆DNA用量以及退火溫度等指標進行篩選和優化,確立瞭可用于福建含笑ISSR-PCR分析最適宜的PCR反應條件:20 μL PCR反應體積中含0.4 mmol*L-1dNTPs,2.5 mmol*L-1 Mg\+\{2+\},1.5 U Taq DNA聚閤酶,0.6 μmol*μL-1引物,30 ng模闆DNA.PCR擴增程序:94 ℃預變性2 min,94 ℃變性30 s,47.3 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,45箇循環,72 ℃延伸7 min,4 ℃保存.應用ISSR體繫對5份福建含笑種質進行瞭擴增,證實瞭該體繫的適用性和穩定性.
이복건함소협편제취적기인조DNA위재료,대영향ISSR-PCR확증효과적일사인소,여dNTPs농도、Mg2+농도、Taq DNA취합매용량、인물용량、모판DNA용량이급퇴화온도등지표진행사선화우화,학립료가용우복건함소ISSR-PCR분석최괄의적PCR반응조건:20 μL PCR반응체적중함0.4 mmol*L-1dNTPs,2.5 mmol*L-1 Mg\+\{2+\},1.5 U Taq DNA취합매,0.6 μmol*μL-1인물,30 ng모판DNA.PCR확증정서:94 ℃예변성2 min,94 ℃변성30 s,47.3 ℃퇴화30 s,72 ℃연신1 min,45개순배,72 ℃연신7 min,4 ℃보존.응용ISSR체계대5빈복건함소충질진행료확증,증실료해체계적괄용성화은정성.
