生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2010年
5期
673-676
,共4页
李涛%满江红%巩伟丽%靳宝锋
李濤%滿江紅%鞏偉麗%靳寶鋒
리도%만강홍%공위려%근보봉
外周血%单核细胞%分离%电穿孔转染
外週血%單覈細胞%分離%電穿孔轉染
외주혈%단핵세포%분리%전천공전염
目的:建立分离纯化人外周血单核细胞及转染的有效方法.方法:应用基于HISTOPAQUE的密度梯度离心及抗体标记纯化的方法分离单核细胞,并以电穿孔技术转染绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)小干扰RNA.结果:基于外周血单核细胞的表面标志分子CD14的流式细胞分析表明得到了高纯度(89.95%)的外周血单核细胞;GFP荧光照片显示GFP表达质粒的转染效率为60%～70%;免疫印迹显示TRAF6的表达抑制(>90%)下调了脂多糖(LPS)对JNK的激活,说明通过电穿孔技术有效递送了TRAF6小干扰RNA,表明单核细胞若缺少TRAF6将抑制LPS-TLR4信号通路的激活.结论:建立了一种高效的从人外周血中分离原代单核细胞的方法,且应用基于NucleoFectorⅡ的电穿孔技术实现了对此原代单核细胞的高效转染,为进一步外周血单核细胞的相关功能研究奠定了方法学基础.
目的:建立分離純化人外週血單覈細胞及轉染的有效方法.方法:應用基于HISTOPAQUE的密度梯度離心及抗體標記純化的方法分離單覈細胞,併以電穿孔技術轉染綠色熒光蛋白(GFP)錶達質粒、腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)小榦擾RNA.結果:基于外週血單覈細胞的錶麵標誌分子CD14的流式細胞分析錶明得到瞭高純度(89.95%)的外週血單覈細胞;GFP熒光照片顯示GFP錶達質粒的轉染效率為60%～70%;免疫印跡顯示TRAF6的錶達抑製(>90%)下調瞭脂多糖(LPS)對JNK的激活,說明通過電穿孔技術有效遞送瞭TRAF6小榦擾RNA,錶明單覈細胞若缺少TRAF6將抑製LPS-TLR4信號通路的激活.結論:建立瞭一種高效的從人外週血中分離原代單覈細胞的方法,且應用基于NucleoFectorⅡ的電穿孔技術實現瞭對此原代單覈細胞的高效轉染,為進一步外週血單覈細胞的相關功能研究奠定瞭方法學基礎.
목적:건립분리순화인외주혈단핵세포급전염적유효방법.방법:응용기우HISTOPAQUE적밀도제도리심급항체표기순화적방법분리단핵세포,병이전천공기술전염록색형광단백(GFP)표체질립、종류배사인자수체상관인자6(TRAF6)소간우RNA.결과:기우외주혈단핵세포적표면표지분자CD14적류식세포분석표명득도료고순도(89.95%)적외주혈단핵세포;GFP형광조편현시GFP표체질립적전염효솔위60%～70%;면역인적현시TRAF6적표체억제(>90%)하조료지다당(LPS)대JNK적격활,설명통과전천공기술유효체송료TRAF6소간우RNA,표명단핵세포약결소TRAF6장억제LPS-TLR4신호통로적격활.결론:건립료일충고효적종인외주혈중분리원대단핵세포적방법,차응용기우NucleoFectorⅡ적전천공기술실현료대차원대단핵세포적고효전염,위진일보외주혈단핵세포적상관공능연구전정료방법학기출.
