江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2010年
5期
48-50
,共3页
郭全海%陈陆%王川庆%吴德峰%李志娟%王永生%刘扬科
郭全海%陳陸%王川慶%吳德峰%李誌娟%王永生%劉颺科
곽전해%진륙%왕천경%오덕봉%리지연%왕영생%류양과
化学转化法%猪圆环病毒2型ORF2基因%重组%腺病毒质粒%构建
化學轉化法%豬圓環病毒2型ORF2基因%重組%腺病毒質粒%構建
화학전화법%저원배병독2형ORF2기인%중조%선병독질립%구건
为了利用化学转化法快速构建携带猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒质粒以便获得表达该基因的重组腺病毒,首先把骨架质粒pAdeasy-1通过化学法转化到氯化钙法制备的E.coli BJ5183感受态菌中,通过含氨苄青霉素的LB平板筛选出含骨架质粒的阳性菌BJ5183/p,再次用化学法把插入有猪圆环病毒2型ORF2基因的穿梭质粒rpShuttle-CMV-276经PmeⅠ酶切线性化后转化到BJ5183/p感受态细胞中进行同源重组,再在含卡那霉素的LB平板上培养,筛选出卡那霉素抗性菌进行质粒抽提纯化,酶切并电泳鉴定,获得重组阳性质粒rPAD-276.结果表明,运用2步化学转化法构建重组腺病毒质粒是一种简便、快捷且容易操作的方法.
為瞭利用化學轉化法快速構建攜帶豬圓環病毒2型ORF2基因的重組腺病毒質粒以便穫得錶達該基因的重組腺病毒,首先把骨架質粒pAdeasy-1通過化學法轉化到氯化鈣法製備的E.coli BJ5183感受態菌中,通過含氨芐青黴素的LB平闆篩選齣含骨架質粒的暘性菌BJ5183/p,再次用化學法把插入有豬圓環病毒2型ORF2基因的穿梭質粒rpShuttle-CMV-276經PmeⅠ酶切線性化後轉化到BJ5183/p感受態細胞中進行同源重組,再在含卡那黴素的LB平闆上培養,篩選齣卡那黴素抗性菌進行質粒抽提純化,酶切併電泳鑒定,穫得重組暘性質粒rPAD-276.結果錶明,運用2步化學轉化法構建重組腺病毒質粒是一種簡便、快捷且容易操作的方法.
위료이용화학전화법쾌속구건휴대저원배병독2형ORF2기인적중조선병독질립이편획득표체해기인적중조선병독,수선파골가질립pAdeasy-1통과화학법전화도록화개법제비적E.coli BJ5183감수태균중,통과함안변청매소적LB평판사선출함골가질립적양성균BJ5183/p,재차용화학법파삽입유저원배병독2형ORF2기인적천사질립rpShuttle-CMV-276경PmeⅠ매절선성화후전화도BJ5183/p감수태세포중진행동원중조,재재함잡나매소적LB평판상배양,사선출잡나매소항성균진행질립추제순화,매절병전영감정,획득중조양성질립rPAD-276.결과표명,운용2보화학전화법구건중조선병독질립시일충간편、쾌첩차용역조작적방법.
