中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2012年
1期
24-27
,共4页
刘彩红%王利利%冯艳玲%朱亚勤
劉綵紅%王利利%馮豔玲%硃亞勤
류채홍%왕리리%풍염령%주아근
hβ-arrestin1%克隆%重组亚型表达%蛋白互作
hβ-arrestin1%剋隆%重組亞型錶達%蛋白互作
hβ-arrestin1%극륭%중조아형표체%단백호작
目的 构建GST/β-arrestin1融合蛋白表达载体,筛选其不同亚型重组子,并诱导表达、纯化蛋白,初步进行蛋白亚型互作比较,为进一步功能研究提供实验基础.方法 提取人源细胞的mRNA,反转录为cDNA.用PCR法扩增hβ-arrestin1全长编码基因,通过SalI和NotI酶切位点将hβ-arrestin1全长定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达载体pGEX-5X- 1-β-arrestin1,并通过BglⅡ单酶切筛选A、B亚型,然后将重组质粒转入E.coliB L21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,用谷胱甘肽-琼脂耱珠亲和纯化表达的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鉴定,互作实验比较亚型的结合能力.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了β-arrestin1A、B原核表达载体,并通过SDS-PAGE证实:经IPTG诱导表达及亲和纯化,从转化重组质粒的BL21菌株中获得了融合蛋白GST/β-arrestin1A、B亚型,通过GST Pulldown初步比较了重组β-arrestin 1A、B蛋白亚型的结合能力.结论 成功构建pGEX-5X -1 -β-arrestin1A、B原核表达载体并确定了融合蛋白的诱导表达及纯化方法,且互作实验显示β-arrestin1A有较强的结合能力,为进一步研究β-arrestin1的生物学功能奠定了基础.
目的 構建GST/β-arrestin1融閤蛋白錶達載體,篩選其不同亞型重組子,併誘導錶達、純化蛋白,初步進行蛋白亞型互作比較,為進一步功能研究提供實驗基礎.方法 提取人源細胞的mRNA,反轉錄為cDNA.用PCR法擴增hβ-arrestin1全長編碼基因,通過SalI和NotI酶切位點將hβ-arrestin1全長定嚮插入pGEX-5X-1中,構建原覈錶達載體pGEX-5X- 1-β-arrestin1,併通過BglⅡ單酶切篩選A、B亞型,然後將重組質粒轉入E.coliB L21中,異丙基硫代β-D半乳糖苷誘導錶達,用穀胱甘肽-瓊脂耱珠親和純化錶達的GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE鑒定,互作實驗比較亞型的結閤能力.結果 酶切及測序結果證明,成功構建瞭β-arrestin1A、B原覈錶達載體,併通過SDS-PAGE證實:經IPTG誘導錶達及親和純化,從轉化重組質粒的BL21菌株中穫得瞭融閤蛋白GST/β-arrestin1A、B亞型,通過GST Pulldown初步比較瞭重組β-arrestin 1A、B蛋白亞型的結閤能力.結論 成功構建pGEX-5X -1 -β-arrestin1A、B原覈錶達載體併確定瞭融閤蛋白的誘導錶達及純化方法,且互作實驗顯示β-arrestin1A有較彊的結閤能力,為進一步研究β-arrestin1的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건GST/β-arrestin1융합단백표체재체,사선기불동아형중조자,병유도표체、순화단백,초보진행단백아형호작비교,위진일보공능연구제공실험기출.방법 제취인원세포적mRNA,반전록위cDNA.용PCR법확증hβ-arrestin1전장편마기인,통과SalI화NotI매절위점장hβ-arrestin1전장정향삽입pGEX-5X-1중,구건원핵표체재체pGEX-5X- 1-β-arrestin1,병통과BglⅡ단매절사선A、B아형,연후장중조질립전입E.coliB L21중,이병기류대β-D반유당감유도표체,용곡광감태-경지마주친화순화표체적GST/β-arrestin1A、B,SDS-PAGE감정,호작실험비교아형적결합능력.결과 매절급측서결과증명,성공구건료β-arrestin1A、B원핵표체재체,병통과SDS-PAGE증실:경IPTG유도표체급친화순화,종전화중조질립적BL21균주중획득료융합단백GST/β-arrestin1A、B아형,통과GST Pulldown초보비교료중조β-arrestin 1A、B단백아형적결합능력.결론 성공구건pGEX-5X -1 -β-arrestin1A、B원핵표체재체병학정료융합단백적유도표체급순화방법,차호작실험현시β-arrestin1A유교강적결합능력,위진일보연구β-arrestin1적생물학공능전정료기출.
