国际医药卫生导报
國際醫藥衛生導報
국제의약위생도보
INTERNATIONAL MEDICINE & HEALTH GUIDANCE NEWS
2009年
6期
81-83
,共3页
实时荧光定量PCR%熔解曲线分析%DNA甲基化%SYBR.Green.I
實時熒光定量PCR%鎔解麯線分析%DNA甲基化%SYBR.Green.I
실시형광정량PCR%용해곡선분석%DNA갑기화%SYBR.Green.I
McMSP%Melting curve analysis%DNA methylation%SYBR Green I
目的 应用McMSP分析抑癌基冈Rassfla启动子区域甲基化,同时比较MSP与McMSP之间的异同.方法 (1)对常规甲基特异性PCR(MSP)扩增后的产物进行熔解曲线分析(MCA);(2)将SYBR Green I直接加入PCR反应前体系进行扩增;(3)探索McMSP分析的灵敏度,将标本按1:10、1:100、1:500、1:1 000、1:5 000、1:10 000稀释后,分别行MSP和MeMSP.结果 (1)不应用商业试剂盒同时将SYBR Green I浓度降低,仍能获得较好结果;(2)Q-PCR MCA能将完全甲基化和完全未甲基化DNA标本区分;(3)在将DNA标本1:10 000稀释后(DNA量＜2pg)仍可以检测到所需要的目的产物,而常规MSP在1:100稀释(DNA量＞100pg)时就已不能检测到产物;(4)McMSP区分正常癌旁组织和癌组织的能力较常规MSP大大增强.结论 利用Q-PCR MCA分析Rassfla启动子区域甲基化迅速准确,操作简便,结果以曲线形式给出,具有较常规MSP更高的灵敏度和区分能力.
目的 應用McMSP分析抑癌基岡Rassfla啟動子區域甲基化,同時比較MSP與McMSP之間的異同.方法 (1)對常規甲基特異性PCR(MSP)擴增後的產物進行鎔解麯線分析(MCA);(2)將SYBR Green I直接加入PCR反應前體繫進行擴增;(3)探索McMSP分析的靈敏度,將標本按1:10、1:100、1:500、1:1 000、1:5 000、1:10 000稀釋後,分彆行MSP和MeMSP.結果 (1)不應用商業試劑盒同時將SYBR Green I濃度降低,仍能穫得較好結果;(2)Q-PCR MCA能將完全甲基化和完全未甲基化DNA標本區分;(3)在將DNA標本1:10 000稀釋後(DNA量＜2pg)仍可以檢測到所需要的目的產物,而常規MSP在1:100稀釋(DNA量＞100pg)時就已不能檢測到產物;(4)McMSP區分正常癌徬組織和癌組織的能力較常規MSP大大增彊.結論 利用Q-PCR MCA分析Rassfla啟動子區域甲基化迅速準確,操作簡便,結果以麯線形式給齣,具有較常規MSP更高的靈敏度和區分能力.
목적 응용McMSP분석억암기강Rassfla계동자구역갑기화,동시비교MSP여McMSP지간적이동.방법 (1)대상규갑기특이성PCR(MSP)확증후적산물진행용해곡선분석(MCA);(2)장SYBR Green I직접가입PCR반응전체계진행확증;(3)탐색McMSP분석적령민도,장표본안1:10、1:100、1:500、1:1 000、1:5 000、1:10 000희석후,분별행MSP화MeMSP.결과 (1)불응용상업시제합동시장SYBR Green I농도강저,잉능획득교호결과;(2)Q-PCR MCA능장완전갑기화화완전미갑기화DNA표본구분;(3)재장DNA표본1:10 000희석후(DNA량＜2pg)잉가이검측도소수요적목적산물,이상규MSP재1:100희석(DNA량＞100pg)시취이불능검측도산물;(4)McMSP구분정상암방조직화암조직적능력교상규MSP대대증강.결론 이용Q-PCR MCA분석Rassfla계동자구역갑기화신속준학,조작간편,결과이곡선형식급출,구유교상규MSP경고적령민도화구분능력.
Objects Detect TSG Rassfla promoter region methylation pattern based on Q-PCR,and compare McMSP and MSP.Methods Firstly,run MCA to the MSP products;secondly,add SYBR Green I to the pre-PCR mix; Finally, dilute the original DNA templates and compare the sensitivity between MSP and McMSP.Results (1)The results are satisfied even without commercial kits and lower SYBR Green I concentration;(2)McMSP can distinguish the samples which are fully methylated and fully unmethylated; (3)Q-PCR can perform perfectly even the original (DNA templates < 2pg),while,MSP become introducible even the original (DNA templates > 100pg); (4) McMSP can distinguish normal and cancer tissue more efficiently than MSP.Conclusions Analyzing TSG promoter region methylation pattern by Q-PCR MCA is quick, sensitive and advantage, as well as its better distinguish ability.
