中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2000年
3期
363-367
,共5页
邓文生%杨希才%康良仪%张奉学%符林春
鄧文生%楊希纔%康良儀%張奉學%符林春
산문생%양희재%강량의%장봉학%부림춘
锤头型核酶%自切割%猴免疫缺陷病毒%动力学分析%速度常数
錘頭型覈酶%自切割%猴免疫缺陷病毒%動力學分析%速度常數
추두형핵매%자절할%후면역결함병독%동역학분석%속도상수
将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶.人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescript SK的Xho I-Sal I位点.通过连续4次克隆获得10拷贝核酶基因的载体.体外转录单体核酶和10体核酶后,37℃温育15 min,至少85%的10体核酶发生自切割,并释放出单体核酶.反式切割研究表明,10体核酶表现出极高的催化活性.尽管10体核酶的浓度不到单体核酶的十分之一,在反应初始25 min内,10体核酶的催化产物平均超过单体核酶13.31%.10体核酶一级反应速度常数是单体核酶的1.86倍.从这些数据可以推断,10体核酶比单体核酶在体内系统中可能具有更大的潜在应用价值.
將錘頭型覈酶切割的一段靶序列連接在覈酶下遊構成自切割覈酶.人工閤成的自切割覈酶基因擴增併剋隆在pBluescript SK的Xho I-Sal I位點.通過連續4次剋隆穫得10拷貝覈酶基因的載體.體外轉錄單體覈酶和10體覈酶後,37℃溫育15 min,至少85%的10體覈酶髮生自切割,併釋放齣單體覈酶.反式切割研究錶明,10體覈酶錶現齣極高的催化活性.儘管10體覈酶的濃度不到單體覈酶的十分之一,在反應初始25 min內,10體覈酶的催化產物平均超過單體覈酶13.31%.10體覈酶一級反應速度常數是單體覈酶的1.86倍.從這些數據可以推斷,10體覈酶比單體覈酶在體內繫統中可能具有更大的潛在應用價值.
장추두형핵매절할적일단파서렬련접재핵매하유구성자절할핵매.인공합성적자절할핵매기인확증병극륭재pBluescript SK적Xho I-Sal I위점.통과련속4차극륭획득10고패핵매기인적재체.체외전록단체핵매화10체핵매후,37℃온육15 min,지소85%적10체핵매발생자절할,병석방출단체핵매.반식절할연구표명,10체핵매표현출겁고적최화활성.진관10체핵매적농도불도단체핵매적십분지일,재반응초시25 min내,10체핵매적최화산물평균초과단체핵매13.31%.10체핵매일급반응속도상수시단체핵매적1.86배.종저사수거가이추단,10체핵매비단체핵매재체내계통중가능구유경대적잠재응용개치.
