中国应用生理学杂志
中國應用生理學雜誌
중국응용생이학잡지
2004年
2期
166-170
,共5页
窦万臣%王任直%李桂林%王欣%李学坤%张波%田士强%姚勇
竇萬臣%王任直%李桂林%王訢%李學坤%張波%田士彊%姚勇
두만신%왕임직%리계림%왕흔%리학곤%장파%전사강%요용
rAAV2%转染%神经干细胞球
rAAV2%轉染%神經榦細胞毬
rAAV2%전염%신경간세포구
目的:探讨重组腺相关病毒2型(rAAV2)对神经干细胞球的转染能力.方法:①将FITC标记的rAAV2(FITC-rAAV2)分成两组,A组直接与神经干细胞球混合,B组与肝素混匀后再与神经干细胞球混合,孵育30 min后在荧光显微镜下观察;②含有GFP报告基因的rAAV2(rAAV2-GFP)与神经干细胞球孵育30 min后,分成两组:A组继续在培养箱内培养,B组分散成单细胞后移植到大鼠脑内,一个月后分别在荧光显微镜下观察神经干细胞球和大鼠脑组织切片中报告基因的表达情况;③将含有低氧启动子(低氧应答元件,HRE)、VEGF和GFP的rAAV2(rAAV2-HRE-VEGF-GFP)转染神经干细胞球后分为两组:A组在低氧条件下培养,B组在常规条件下培养,72 h后观察报告基因的表达情况.结果:①FITC-rAAV2转染神经干细胞球的结果:A组有明亮的绿色荧光,B组基本无绿色荧光;②rAAV2-GFP转染神经干细胞球后一个月,A、B两组均可以看到绿色荧光;③rAAV2-HRE-VEGF-GFP转染神经干细胞球后72 h,A组可见绿色荧光,B组无绿色荧光.结论:rAAV2可以与神经干细胞球特异性结合,rAAV2携带的外源基因在体内和体外均可以有效表达,rAAV2携带外源基因的表达可以人为调控.
目的:探討重組腺相關病毒2型(rAAV2)對神經榦細胞毬的轉染能力.方法:①將FITC標記的rAAV2(FITC-rAAV2)分成兩組,A組直接與神經榦細胞毬混閤,B組與肝素混勻後再與神經榦細胞毬混閤,孵育30 min後在熒光顯微鏡下觀察;②含有GFP報告基因的rAAV2(rAAV2-GFP)與神經榦細胞毬孵育30 min後,分成兩組:A組繼續在培養箱內培養,B組分散成單細胞後移植到大鼠腦內,一箇月後分彆在熒光顯微鏡下觀察神經榦細胞毬和大鼠腦組織切片中報告基因的錶達情況;③將含有低氧啟動子(低氧應答元件,HRE)、VEGF和GFP的rAAV2(rAAV2-HRE-VEGF-GFP)轉染神經榦細胞毬後分為兩組:A組在低氧條件下培養,B組在常規條件下培養,72 h後觀察報告基因的錶達情況.結果:①FITC-rAAV2轉染神經榦細胞毬的結果:A組有明亮的綠色熒光,B組基本無綠色熒光;②rAAV2-GFP轉染神經榦細胞毬後一箇月,A、B兩組均可以看到綠色熒光;③rAAV2-HRE-VEGF-GFP轉染神經榦細胞毬後72 h,A組可見綠色熒光,B組無綠色熒光.結論:rAAV2可以與神經榦細胞毬特異性結閤,rAAV2攜帶的外源基因在體內和體外均可以有效錶達,rAAV2攜帶外源基因的錶達可以人為調控.
목적:탐토중조선상관병독2형(rAAV2)대신경간세포구적전염능력.방법:①장FITC표기적rAAV2(FITC-rAAV2)분성량조,A조직접여신경간세포구혼합,B조여간소혼균후재여신경간세포구혼합,부육30 min후재형광현미경하관찰;②함유GFP보고기인적rAAV2(rAAV2-GFP)여신경간세포구부육30 min후,분성량조:A조계속재배양상내배양,B조분산성단세포후이식도대서뇌내,일개월후분별재형광현미경하관찰신경간세포구화대서뇌조직절편중보고기인적표체정황;③장함유저양계동자(저양응답원건,HRE)、VEGF화GFP적rAAV2(rAAV2-HRE-VEGF-GFP)전염신경간세포구후분위량조:A조재저양조건하배양,B조재상규조건하배양,72 h후관찰보고기인적표체정황.결과:①FITC-rAAV2전염신경간세포구적결과:A조유명량적록색형광,B조기본무록색형광;②rAAV2-GFP전염신경간세포구후일개월,A、B량조균가이간도록색형광;③rAAV2-HRE-VEGF-GFP전염신경간세포구후72 h,A조가견록색형광,B조무록색형광.결론:rAAV2가이여신경간세포구특이성결합,rAAV2휴대적외원기인재체내화체외균가이유효표체,rAAV2휴대외원기인적표체가이인위조공.
