微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
1期
125-128
,共4页
庞永奇%贾洪革%方荣祥%郭蔼光%陈晓英
龐永奇%賈洪革%方榮祥%郭藹光%陳曉英
방영기%가홍혁%방영상%곽애광%진효영
Cre重组酶%共转化%不相容性质粒%绿色荧光蛋白
Cre重組酶%共轉化%不相容性質粒%綠色熒光蛋白
Cre중조매%공전화%불상용성질립%록색형광단백
源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别34bp的靶DNA序列loxP,进行位点特异性的重组反应.为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到具有不同抗性的两种不相容质粒中,然后将构建的原核表达载体pET30a-Cre和pET23b-loxGFP电击共转化大肠杆菌BL21(DE3),利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选.通过直接观察转化子的绿色荧光,便可以显示Cre酶的体内重组活性,并进一步通过SDS-PAGE分析、质粒酶切鉴定进行了验证.结果表明:以gfp为报告基因、通过两种不相容质粒共转化大肠杆菌可以为研究和改进Cre/loxP重组系统提供一种简便直观的检测方法.
源自噬菌體P1的Cre重組酶可以識彆34bp的靶DNA序列loxP,進行位點特異性的重組反應.為瞭簡便地檢測Cre酶在大腸桿菌中的重組活性,分彆將cre基因和上下遊帶有loxP的綠色熒光蛋白基因(gfp)剋隆到具有不同抗性的兩種不相容質粒中,然後將構建的原覈錶達載體pET30a-Cre和pET23b-loxGFP電擊共轉化大腸桿菌BL21(DE3),利用卡那黴素和氨芐青黴素雙抗生素抗性進行篩選.通過直接觀察轉化子的綠色熒光,便可以顯示Cre酶的體內重組活性,併進一步通過SDS-PAGE分析、質粒酶切鑒定進行瞭驗證.結果錶明:以gfp為報告基因、通過兩種不相容質粒共轉化大腸桿菌可以為研究和改進Cre/loxP重組繫統提供一種簡便直觀的檢測方法.
원자서균체P1적Cre중조매가이식별34bp적파DNA서렬loxP,진행위점특이성적중조반응.위료간편지검측Cre매재대장간균중적중조활성,분별장cre기인화상하유대유loxP적록색형광단백기인(gfp)극륭도구유불동항성적량충불상용질립중,연후장구건적원핵표체재체pET30a-Cre화pET23b-loxGFP전격공전화대장간균BL21(DE3),이용잡나매소화안변청매소쌍항생소항성진행사선.통과직접관찰전화자적록색형광,편가이현시Cre매적체내중조활성,병진일보통과SDS-PAGE분석、질립매절감정진행료험증.결과표명:이gfp위보고기인、통과량충불상용질립공전화대장간균가이위연구화개진Cre/loxP중조계통제공일충간편직관적검측방법.
