中国现代普通外科进展
中國現代普通外科進展
중국현대보통외과진전
CHINESE JOURNAL OF CURRENT ADVANCES IN GENERAL SURGERY
2005年
5期
288-291
,共4页
赵新%张培瑞%余祥海%廖明芳%景在平
趙新%張培瑞%餘祥海%廖明芳%景在平
조신%장배서%여상해%료명방%경재평
基质金属蛋白酶抑制剂·腺病毒%人·肌%平滑%血管
基質金屬蛋白酶抑製劑·腺病毒%人·肌%平滑%血管
기질금속단백매억제제·선병독%인·기%평활%혈관
目的:构建含人TIMP-2(hTIMP-2)基因的重组腺病毒载体并在大鼠主动脉平滑肌细胞中表达,为血管疾病基因治疗提供实验基础.方法:利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pTrack-CMV-hTIMP-2共转化BJ5183受体菌,并在其中发生同源重组,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子;重组腺病毒质粒AdhTIMP-2经过293细胞的包装,扩增和纯化后,测定病毒滴度.腺病毒体外感染大鼠主动脉平滑肌细胞,一步法提取细胞总RNA,RT-PCR检测hTIMP-2的mRNA.并收集细胞上清,进行Western blot检测TIMP-2蛋白.结果:得到了携带hTIMP-2基因的重组腺病毒,纯化后滴度为4×1011efu/ml,在感染VSMC后24h即检测到hTIMP-2的表达.结论:成功地构建了携带hTIMP-2的重组腺病毒载体并体外转染VSMC,为下一步应用于血管疾病基因治疗提供了基础.
目的:構建含人TIMP-2(hTIMP-2)基因的重組腺病毒載體併在大鼠主動脈平滑肌細胞中錶達,為血管疾病基因治療提供實驗基礎.方法:利用基因重組技術將腺病毒骨架質粒pAdEasy-1以及線性化的重組穿梭質粒pTrack-CMV-hTIMP-2共轉化BJ5183受體菌,併在其中髮生同源重組,利用重組前後抗性的改變篩選齣重組子;重組腺病毒質粒AdhTIMP-2經過293細胞的包裝,擴增和純化後,測定病毒滴度.腺病毒體外感染大鼠主動脈平滑肌細胞,一步法提取細胞總RNA,RT-PCR檢測hTIMP-2的mRNA.併收集細胞上清,進行Western blot檢測TIMP-2蛋白.結果:得到瞭攜帶hTIMP-2基因的重組腺病毒,純化後滴度為4×1011efu/ml,在感染VSMC後24h即檢測到hTIMP-2的錶達.結論:成功地構建瞭攜帶hTIMP-2的重組腺病毒載體併體外轉染VSMC,為下一步應用于血管疾病基因治療提供瞭基礎.
목적:구건함인TIMP-2(hTIMP-2)기인적중조선병독재체병재대서주동맥평활기세포중표체,위혈관질병기인치료제공실험기출.방법:이용기인중조기술장선병독골가질립pAdEasy-1이급선성화적중조천사질립pTrack-CMV-hTIMP-2공전화BJ5183수체균,병재기중발생동원중조,이용중조전후항성적개변사선출중조자;중조선병독질립AdhTIMP-2경과293세포적포장,확증화순화후,측정병독적도.선병독체외감염대서주동맥평활기세포,일보법제취세포총RNA,RT-PCR검측hTIMP-2적mRNA.병수집세포상청,진행Western blot검측TIMP-2단백.결과:득도료휴대hTIMP-2기인적중조선병독,순화후적도위4×1011efu/ml,재감염VSMC후24h즉검측도hTIMP-2적표체.결론:성공지구건료휴대hTIMP-2적중조선병독재체병체외전염VSMC,위하일보응용우혈관질병기인치료제공료기출.
