CAJ | 학술논문

猪囊尾蚴CE18重组蛋白(rCE18)在大肠杆菌表达后形成包涵体,为了获得高纯度的.有生物活性的rCE18,本研究采用超声破碎茵体,0.2%、2%DOC(脱氧胆酸钠)逐次洗涤包涵体及0.9%SKL(十二烷基肌氨酸钠)溶解包涵体后,利用透析与凝胶过滤层析技术相结合对rCE18进行复性和纯化.同时,采用GST-FF亲和柱层析及SDS-PAGE胶回收蛋白两种方法纯化rCE18,比较三者的纯化效果.并通过问接ELISA检测复性蛋白的生物学活性.结果表明:经透析与凝胶层析复性纯化后的rCE18蛋白的纯度可达到60%以上,活性回收率为41.3%,间接ELISA证实,复性后的rCE18蛋白能特异性识别猪囊虫阳性血清,检测敏感性高达97.2%,与全囊虫抗原检测的符合率为100%.本试验初步建立了猪囊尾蚴rCE18包涵体纯化及复性的有效方法,为猪囊尾蚴rCE18蛋白的诊断应用奠定了基础.
저낭미유CE18중조단백(rCE18)재대장간균표체후형성포함체,위료획득고순도적.유생물활성적rCE18,본연구채용초성파쇄인체,0.2%、2%DOC(탈양담산납)축차세조포함체급0.9%SKL(십이완기기안산납)용해포함체후,이용투석여응효과려층석기술상결합대rCE18진행복성화순화.동시,채용GST-FF친화주층석급SDS-PAGE효회수단백량충방법순화rCE18,비교삼자적순화효과.병통과문접ELISA검측복성단백적생물학활성.결과표명:경투석여응효층석복성순화후적rCE18단백적순도가체도60%이상,활성회수솔위41.3%,간접ELISA증실,복성후적rCE18단백능특이성식별저낭충양성혈청,검측민감성고체97.2%,여전낭충항원검측적부합솔위100%.본시험초보건립료저낭미유rCE18포함체순화급복성적유효방법,위저낭미유rCE18단백적진단응용전정료기출.