中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2009年
9期
828-831
,共4页
陈大玮%邬玉兰%刘志刚%吴序栎%孔小丽
陳大瑋%鄔玉蘭%劉誌剛%吳序櫟%孔小麗
진대위%오옥란%류지강%오서력%공소려
鸡蛋%卵类粘蛋白%基因克隆%原核载体%表达
鷄蛋%卵類粘蛋白%基因剋隆%原覈載體%錶達
계단%란류점단백%기인극륭%원핵재체%표체
目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础.方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白.结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633 bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%.该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21 kD,与理论值均相符.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE 分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21 (DE3) 中高效表达.结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础.
目的:本研究利用PET錶達載體剋隆,錶達鷄蛋主要過敏原卵類粘蛋白基因,為鷄蛋過敏疾病的特異性診斷和治療以及進一步的實驗研究奠定瞭一定的基礎.方法:提取鷄輸卵管組織總RNA,利用RT-PCR技術擴增卵類粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),併與已知序列進行同源性比較,將該片段連接入原覈錶達載體pET-28a,IPTG誘導錶達目的蛋白.結果:成功剋隆鷄蛋主要過敏原卵類粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全長基因,該基因的開放閱讀框長度為633 bp(包括終止密碼子),編碼210箇氨基痠,與GenBank提供的OVM基因序列同源性達99%.該序列編碼的蛋白為小分子量蛋白,相對分子質量約為21 kD,與理論值均相符.IPTG誘導錶達後,SDS-PAGE 分析錶明目的蛋白在宿主大腸桿菌BL21 (DE3) 中高效錶達.結論:本研究採用體外重組的方法剋隆齣卵類粘蛋白基因,併實現在大腸桿菌中大量錶達,這為後續鷄蛋食品基礎性研究奠定基礎.
목적:본연구이용PET표체재체극륭,표체계단주요과민원란류점단백기인,위계단과민질병적특이성진단화치료이급진일보적실험연구전정료일정적기출.방법:제취계수란관조직총RNA,이용RT-PCR기술확증란류점단백기인(ovomucoid,OVM),병여이지서렬진행동원성비교,장해편단련접입원핵표체재체pET-28a,IPTG유도표체목적단백.결과:성공극륭계단주요과민원란류점단백(ovomucoid,OVM)적전장기인,해기인적개방열독광장도위633 bp(포괄종지밀마자),편마210개안기산,여GenBank제공적OVM기인서렬동원성체99%.해서렬편마적단백위소분자량단백,상대분자질량약위21 kD,여이론치균상부.IPTG유도표체후,SDS-PAGE 분석표명목적단백재숙주대장간균BL21 (DE3) 중고효표체.결론:본연구채용체외중조적방법극륭출란류점단백기인,병실현재대장간균중대량표체,저위후속계단식품기출성연구전정기출.
