井冈山学院学报(自然科学版)
井岡山學院學報(自然科學版)
정강산학원학보(자연과학판)
JOURNAL OF JINGGANGSHAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
2期
57-62
,共6页
杨家大%商海涛%魏泓%杨婉身
楊傢大%商海濤%魏泓%楊婉身
양가대%상해도%위홍%양완신
巴马香猪%CYP3A29%TaqMan
巴馬香豬%CYP3A29%TaqMan
파마향저%CYP3A29%TaqMan
目的 建立巴马香猪CYP3A29 mRNA表达的TaqMan定量方法.方法 通过RT-PCR、TA克隆等技术制 备CYP3A29-pMD18-T和β-actin-pMD18-T实时荧光定量标准品,并以CYP3A29-pMD18-T标准品为模板,对不同浓度Mg2与探针组合的TaqMan反应体系进行筛选,TaqMan PCR方法,并对其有效性及重复性进行评价.结果 筛选到的TaqMan PcR方法为:PCR总体积10 μL,其中含1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L上下游引物、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L探针、1 μL模板.热循环条件为94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→读板).结论 建立了有效测定巴马香猪CYP3A29 mRNA拷贝数浓度的TaqMan PCR方法.通过该方法分别定量CYP3A29和β-actin mRNA的拷贝数浓度,即可求出CYP3A29mRNA的表达水平.
目的 建立巴馬香豬CYP3A29 mRNA錶達的TaqMan定量方法.方法 通過RT-PCR、TA剋隆等技術製 備CYP3A29-pMD18-T和β-actin-pMD18-T實時熒光定量標準品,併以CYP3A29-pMD18-T標準品為模闆,對不同濃度Mg2與探針組閤的TaqMan反應體繫進行篩選,TaqMan PCR方法,併對其有效性及重複性進行評價.結果 篩選到的TaqMan PcR方法為:PCR總體積10 μL,其中含1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L上下遊引物、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L探針、1 μL模闆.熱循環條件為94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→讀闆).結論 建立瞭有效測定巴馬香豬CYP3A29 mRNA拷貝數濃度的TaqMan PCR方法.通過該方法分彆定量CYP3A29和β-actin mRNA的拷貝數濃度,即可求齣CYP3A29mRNA的錶達水平.
목적 건립파마향저CYP3A29 mRNA표체적TaqMan정량방법.방법 통과RT-PCR、TA극륭등기술제 비CYP3A29-pMD18-T화β-actin-pMD18-T실시형광정량표준품,병이CYP3A29-pMD18-T표준품위모판,대불동농도Mg2여탐침조합적TaqMan반응체계진행사선,TaqMan PCR방법,병대기유효성급중복성진행평개.결과 사선도적TaqMan PcR방법위:PCR총체적10 μL,기중함1xBuffer、5.5 mmol/L Mg2、0.8 mmol/L dNTPmix、0.3 μmol/L상하유인물、0.2 U/μL rTaq、0.I μmol/L탐침、1 μL모판.열순배조건위94℃5 min→40cycles(94℃15 s→60℃ 45 s→독판).결론 건립료유효측정파마향저CYP3A29 mRNA고패수농도적TaqMan PCR방법.통과해방법분별정량CYP3A29화β-actin mRNA적고패수농도,즉가구출CYP3A29mRNA적표체수평.
