山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2011年
41期
19-21
,共3页
李全营%李谌%郭威%吴秀成%王巍%刘丹平
李全營%李諶%郭威%吳秀成%王巍%劉丹平
리전영%리심%곽위%오수성%왕외%류단평
骨形态发生蛋白类%低氧诱导因子%基因工程%重组腺病毒载体
骨形態髮生蛋白類%低氧誘導因子%基因工程%重組腺病毒載體
골형태발생단백류%저양유도인자%기인공정%중조선병독재체
目的 构建人BMP2-IRES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,并转染HEK293细胞,为下一步转染骨髓基质细胞和体内实验打下基础.方法 PCR扩增HIF1αmu片段,用BstXⅠ和XbaⅠ双酶切回收目的片段.pIRES2-EGFP用BstXⅠ和Xba Ⅰ进行双酶切后回收大片段.将上述回收的目的基因与载体片段连接,然后转化感受态大肠杆菌DH5α扩增；PCR扩增BMP2片段,用Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后回收目的片段.把目的基因与载体片段连接,转化感受态大肠杆菌DH5α扩增重组腺病毒表达载体,通过酶切分析、PCR和测序进行鉴定.将构建好的质粒转染HEK293细胞,检测病毒液滴度.结果 构建了人BMP2-1RES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,转染HEK293细胞见绿色荧光表达.结论 成功构建了人BMP2 -IRES-HIF1 αmu腺病毒表达载体,酶切分析及DNA测序证实质粒构建正确,质粒成功转染HEK293细胞,并见绿色荧光蛋白表达.
目的 構建人BMP2-IRES-HIF1 αmu腺病毒錶達載體,併轉染HEK293細胞,為下一步轉染骨髓基質細胞和體內實驗打下基礎.方法 PCR擴增HIF1αmu片段,用BstXⅠ和XbaⅠ雙酶切迴收目的片段.pIRES2-EGFP用BstXⅠ和Xba Ⅰ進行雙酶切後迴收大片段.將上述迴收的目的基因與載體片段連接,然後轉化感受態大腸桿菌DH5α擴增；PCR擴增BMP2片段,用Nhe Ⅰ和BamH Ⅰ雙酶切後迴收目的片段.把目的基因與載體片段連接,轉化感受態大腸桿菌DH5α擴增重組腺病毒錶達載體,通過酶切分析、PCR和測序進行鑒定.將構建好的質粒轉染HEK293細胞,檢測病毒液滴度.結果 構建瞭人BMP2-1RES-HIF1 αmu腺病毒錶達載體,轉染HEK293細胞見綠色熒光錶達.結論 成功構建瞭人BMP2 -IRES-HIF1 αmu腺病毒錶達載體,酶切分析及DNA測序證實質粒構建正確,質粒成功轉染HEK293細胞,併見綠色熒光蛋白錶達.
목적 구건인BMP2-IRES-HIF1 αmu선병독표체재체,병전염HEK293세포,위하일보전염골수기질세포화체내실험타하기출.방법 PCR확증HIF1αmu편단,용BstXⅠ화XbaⅠ쌍매절회수목적편단.pIRES2-EGFP용BstXⅠ화Xba Ⅰ진행쌍매절후회수대편단.장상술회수적목적기인여재체편단련접,연후전화감수태대장간균DH5α확증；PCR확증BMP2편단,용Nhe Ⅰ화BamH Ⅰ쌍매절후회수목적편단.파목적기인여재체편단련접,전화감수태대장간균DH5α확증중조선병독표체재체,통과매절분석、PCR화측서진행감정.장구건호적질립전염HEK293세포,검측병독액적도.결과 구건료인BMP2-1RES-HIF1 αmu선병독표체재체,전염HEK293세포견록색형광표체.결론 성공구건료인BMP2 -IRES-HIF1 αmu선병독표체재체,매절분석급DNA측서증실질립구건정학,질립성공전염HEK293세포,병견록색형광단백표체.
