CAJ | 학술논문

目的探讨电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk-1和ExTek的真核表达质粒肿瘤内转移对视网膜母细胞瘤(RB)移植瘤生长的治疗效果及其作用机制.方法通过体内、外实验证实sFlk-1和ExTek对RB的抑制作用及其机制.(1)体外实验:以阳离子脂质体介导质粒pCI-sFlk-1转染人胚肾293细胞24 h后收集细胞培养液,分别按1∶ 1、2∶ 1、3∶ 1的比例与RPMI-1640培养基混合,补充胎牛血清至浓度为10%,培养RB细胞并绘制细胞生长曲线.(2)体内实验:将1×107个人RB细胞(HXO-Rb44)悬液接种至40只裸鼠右后腿皮下,建立RB移植瘤模型.治疗组将电穿孔技术介导表达质粒pCI-sFlk-1(15 μg)和pCI-ExTek(15 μg)联合导入瘤体后电击,对照组注射生理盐水后电击.每周1次,连续3次.从第1次治疗开始至第3次治疗后1周,期间每周测量肿瘤体积2次,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率.采用抗平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学染色法确定治疗组和对照组肿瘤内微血管密度和肿瘤内血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体Flk-1的表达.结果 sFlk-1对体外培养的RB细胞的生长无明显抑制作用.但在体内sFlk-1和ExTek联合应用能够显著抑制RB移植瘤的生长,抑瘤率为80.04%.治疗组平均微血管密度为(26.69±2.95)个/200倍视野,明显低于对照组(44.51±6.11)个/200倍视野,2组比较差异有统计学意义(P<0.05).尽管2组间VEGF染色强度无明显差别,但治疗组Flk-1的染色强度高于对照组. 结论电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk-1和ExTek的表达质粒导入RB肿瘤,可明显抑制肿瘤的生长,其作用机制为抑制肿瘤血管的生成.
목적탐토전천공방법개도편마가용성혈관내피세포막수체sFlk-1화ExTek적진핵표체질립종류내전이대시망막모세포류(RB)이식류생장적치료효과급기작용궤제.방법통과체내、외실험증실sFlk-1화ExTek대RB적억제작용급기궤제.(1)체외실험:이양리자지질체개도질립pCI-sFlk-1전염인배신293세포24 h후수집세포배양액,분별안1∶ 1、2∶ 1、3∶ 1적비례여RPMI-1640배양기혼합,보충태우혈청지농도위10%,배양RB세포병회제세포생장곡선.(2)체내실험:장1×107개인RB세포(HXO-Rb44)현액접충지40지라서우후퇴피하,건립RB이식류모형.치료조장전천공기술개도표체질립pCI-sFlk-1(15 μg)화pCI-ExTek(15 μg)연합도입류체후전격,대조조주사생리염수후전격.매주1차,련속3차.종제1차치료개시지제3차치료후1주,기간매주측량종류체적2차,회제종류생장곡선,계산억류솔.채용항평활기기동단백항체면역조직화학염색법학정치료조화대조조종류내미혈관밀도화종류내혈관내피세포생장인자(VEGF)급기수체Flk-1적표체.결과 sFlk-1대체외배양적RB세포적생장무명현억제작용.단재체내sFlk-1화ExTek연합응용능구현저억제RB이식류적생장,억류솔위80.04%.치료조평균미혈관밀도위(26.69±2.95)개/200배시야,명현저우대조조(44.51±6.11)개/200배시야,2조비교차이유통계학의의(P<0.05).진관2조간VEGF염색강도무명현차별,단치료조Flk-1적염색강도고우대조조. 결론전천공방법개도편마가용성혈관내피세포막수체sFlk-1화ExTek적표체질립도입RB종류,가명현억제종류적생장,기작용궤제위억제종류혈관적생성.