北京大学学报(医学版)
北京大學學報(醫學版)
북경대학학보(의학판)
JOURNAL OF PEAKING UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2003年
4期
360-363
,共4页
王露%范慧%莫晓宁%张颖妹%魏征人%钟英成%黄大无
王露%範慧%莫曉寧%張穎妹%魏徵人%鐘英成%黃大無
왕로%범혜%막효저%장영매%위정인%종영성%황대무
PDCD5%重组蛋白质类/分离和提纯%凋亡%HL-60细胞
PDCD5%重組蛋白質類/分離和提純%凋亡%HL-60細胞
PDCD5%중조단백질류/분리화제순%조망%HL-60세포
目的:建立简便、有效的原核表达促凋亡相关蛋白PDCD5的纯化路线, 获得高纯度的PDCD5蛋白,并观察其稳定性.方法:以包涵体形式表达的PDCD5融合蛋白,经包涵体洗涤、变性、复性、酶切、DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200两步层析分离获得PDCD5蛋白.选用毛细管电泳方法检定蛋白质纯度,SDS-PAGE检定蛋白质的稳定性.结果:经毛细管电泳方法检测PDCD5蛋白纯度为100%,相对分子质量15 800,等电点5.9. 生物学活性分析PDCD5蛋白能够促进撤除细胞因子的HL-60细胞的凋亡,呈现一定的量效关系.稳定性研究发现储藏中的PDCD5蛋白不稳定,对温度敏感,4 ℃和25 ℃极易降解,而-20 ℃和冻干保存则相对稳定.结论:本研究建立的蛋白纯化方法可以获得大量、高纯度PDCD5蛋白.稳定性实验提示PDCD5宜在-20 ℃以下或冻干保存.
目的:建立簡便、有效的原覈錶達促凋亡相關蛋白PDCD5的純化路線, 穫得高純度的PDCD5蛋白,併觀察其穩定性.方法:以包涵體形式錶達的PDCD5融閤蛋白,經包涵體洗滌、變性、複性、酶切、DEAE Sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200兩步層析分離穫得PDCD5蛋白.選用毛細管電泳方法檢定蛋白質純度,SDS-PAGE檢定蛋白質的穩定性.結果:經毛細管電泳方法檢測PDCD5蛋白純度為100%,相對分子質量15 800,等電點5.9. 生物學活性分析PDCD5蛋白能夠促進撤除細胞因子的HL-60細胞的凋亡,呈現一定的量效關繫.穩定性研究髮現儲藏中的PDCD5蛋白不穩定,對溫度敏感,4 ℃和25 ℃極易降解,而-20 ℃和凍榦保存則相對穩定.結論:本研究建立的蛋白純化方法可以穫得大量、高純度PDCD5蛋白.穩定性實驗提示PDCD5宜在-20 ℃以下或凍榦保存.
목적:건립간편、유효적원핵표체촉조망상관단백PDCD5적순화로선, 획득고순도적PDCD5단백,병관찰기은정성.방법:이포함체형식표체적PDCD5융합단백,경포함체세조、변성、복성、매절、DEAE Sepharose Fast Flow화Sephacryl S-200량보층석분리획득PDCD5단백.선용모세관전영방법검정단백질순도,SDS-PAGE검정단백질적은정성.결과:경모세관전영방법검측PDCD5단백순도위100%,상대분자질량15 800,등전점5.9. 생물학활성분석PDCD5단백능구촉진철제세포인자적HL-60세포적조망,정현일정적량효관계.은정성연구발현저장중적PDCD5단백불은정,대온도민감,4 ℃화25 ℃겁역강해,이-20 ℃화동간보존칙상대은정.결론:본연구건립적단백순화방법가이획득대량、고순도PDCD5단백.은정성실험제시PDCD5의재-20 ℃이하혹동간보존.
