中国康复理论与实践
中國康複理論與實踐
중국강복이론여실천
CHINESE JOURNAL OF REHABILITATION THEORY & PRACTICE
2006年
8期
682-684,中插1
,共4页
焦嫦亮%张阳德%谢祁阳%潘一峰
焦嫦亮%張暘德%謝祁暘%潘一峰
초항량%장양덕%사기양%반일봉
小鼠%间充质干细胞%脂肪细胞%组织工程
小鼠%間充質榦細胞%脂肪細胞%組織工程
소서%간충질간세포%지방세포%조직공정
目的 建立小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和鉴定方法,稳定和优化骨髓MSCs在体外定向向脂肪细胞分化的适宜诱导条件.方法 采取贴壁细胞分离法分离和纯化小鼠骨髓MSCs;选用第5代MSCs分别采用CFU-f培养法和CFU-f集落再克隆生成CFU-f集落法鉴定MSCs的增殖和自我更新能力;利用不同组合的成脂培养基定向诱导MSCs分化为脂肪细胞;利用油红O免疫组化染色鉴定分化后的细胞.结果 分离和纯化的小鼠骨髓MSCs呈均匀有序的成纤维母细胞样形态;植入2×103～1×105MSC细胞/皿时,可生成不同比例的纯的CFU-f集落,且数量与种入的细胞数呈良好的线性关系;小型CFU-f集落再克隆生成CFU-f集落的能力较弱,而大型CFU-f集落具有较高的再克隆生成CFU-f集落的能力,再克隆生成CFU-f集落率高达90%,而且1个目的集落可再克隆生成多个CFU-f集落;不同诱导方案均可诱导MSC生成脂肪细胞,而合用地塞米松(DM)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、胰岛素(IS)和消炎痛(ID)时效果最佳,诱导MSC生成脂肪细胞的效率可高达96%以上,且生成的细胞绝大多数为成熟脂肪细胞.结论 采取贴壁细胞分离法经过长期传代可得到纯化的小鼠骨髓MSCs,MSCs具有高度增殖、自我更新和定向分化为脂肪细胞的能力;DM、IBMX、IS和ID 4种诱导剂合用可诱导96%以上的该细胞定向分化为成熟脂肪细胞.
目的 建立小鼠骨髓間充質榦細胞(MSCs)的分離和鑒定方法,穩定和優化骨髓MSCs在體外定嚮嚮脂肪細胞分化的適宜誘導條件.方法 採取貼壁細胞分離法分離和純化小鼠骨髓MSCs;選用第5代MSCs分彆採用CFU-f培養法和CFU-f集落再剋隆生成CFU-f集落法鑒定MSCs的增殖和自我更新能力;利用不同組閤的成脂培養基定嚮誘導MSCs分化為脂肪細胞;利用油紅O免疫組化染色鑒定分化後的細胞.結果 分離和純化的小鼠骨髓MSCs呈均勻有序的成纖維母細胞樣形態;植入2×103～1×105MSC細胞/皿時,可生成不同比例的純的CFU-f集落,且數量與種入的細胞數呈良好的線性關繫;小型CFU-f集落再剋隆生成CFU-f集落的能力較弱,而大型CFU-f集落具有較高的再剋隆生成CFU-f集落的能力,再剋隆生成CFU-f集落率高達90%,而且1箇目的集落可再剋隆生成多箇CFU-f集落;不同誘導方案均可誘導MSC生成脂肪細胞,而閤用地塞米鬆(DM)、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)、胰島素(IS)和消炎痛(ID)時效果最佳,誘導MSC生成脂肪細胞的效率可高達96%以上,且生成的細胞絕大多數為成熟脂肪細胞.結論 採取貼壁細胞分離法經過長期傳代可得到純化的小鼠骨髓MSCs,MSCs具有高度增殖、自我更新和定嚮分化為脂肪細胞的能力;DM、IBMX、IS和ID 4種誘導劑閤用可誘導96%以上的該細胞定嚮分化為成熟脂肪細胞.
목적 건립소서골수간충질간세포(MSCs)적분리화감정방법,은정화우화골수MSCs재체외정향향지방세포분화적괄의유도조건.방법 채취첩벽세포분리법분리화순화소서골수MSCs;선용제5대MSCs분별채용CFU-f배양법화CFU-f집락재극륭생성CFU-f집락법감정MSCs적증식화자아경신능력;이용불동조합적성지배양기정향유도MSCs분화위지방세포;이용유홍O면역조화염색감정분화후적세포.결과 분리화순화적소서골수MSCs정균균유서적성섬유모세포양형태;식입2×103～1×105MSC세포/명시,가생성불동비례적순적CFU-f집락,차수량여충입적세포수정량호적선성관계;소형CFU-f집락재극륭생성CFU-f집락적능력교약,이대형CFU-f집락구유교고적재극륭생성CFU-f집락적능력,재극륭생성CFU-f집락솔고체90%,이차1개목적집락가재극륭생성다개CFU-f집락;불동유도방안균가유도MSC생성지방세포,이합용지새미송(DM)、3-이정기-1-갑기황표령(IBMX)、이도소(IS)화소염통(ID)시효과최가,유도MSC생성지방세포적효솔가고체96%이상,차생성적세포절대다수위성숙지방세포.결론 채취첩벽세포분리법경과장기전대가득도순화적소서골수MSCs,MSCs구유고도증식、자아경신화정향분화위지방세포적능력;DM、IBMX、IS화ID 4충유도제합용가유도96%이상적해세포정향분화위성숙지방세포.
