医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2007年
3期
234-239
,共6页
邹利军%杨述华%李进%杨渝珍%梅荣成
鄒利軍%楊述華%李進%楊渝珍%梅榮成
추리군%양술화%리진%양투진%매영성
非融合表达%pIRES-p53-p14ARF%细胞凋亡%基因突变
非融閤錶達%pIRES-p53-p14ARF%細胞凋亡%基因突變
비융합표체%pIRES-p53-p14ARF%세포조망%기인돌변
目的 构建单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF并观察其对骨肉瘤细胞增殖生长的影响及其功能初探.方法 将p53与p14ARF全长cDNA编码区依次亚克隆至pIRES载体中,并通过PCR、酶切鉴定重组质粒.用Lipofectamin 2000将野生型pIRES-p53-p14ARF真核表达载体转染MG-63细胞,48 h后采用axiovent200型倒置显微镜、荧光免疫细胞化学,观察其在细胞内的表达并初步探究其抑瘤功能.结果 成功构建出含p53与p14ARF全长基因片段的单启动子非融合表达载体pIRES-p53-p14ARF.RT-PCR,酶切鉴定质粒大小、位点均符合实验设计.荧光免疫细胞化学检测显示p53阳性细胞同时也表现为p14ARF免疫反应阳性,转染后瘤细胞可见散在凋亡现象.结论 pIRES-p53-p14ARF非融合表达载体的构建与真核细胞导入、目的基因表达成功.
目的 構建單啟動子非融閤錶達載體pIRES-p53-p14ARF併觀察其對骨肉瘤細胞增殖生長的影響及其功能初探.方法 將p53與p14ARF全長cDNA編碼區依次亞剋隆至pIRES載體中,併通過PCR、酶切鑒定重組質粒.用Lipofectamin 2000將野生型pIRES-p53-p14ARF真覈錶達載體轉染MG-63細胞,48 h後採用axiovent200型倒置顯微鏡、熒光免疫細胞化學,觀察其在細胞內的錶達併初步探究其抑瘤功能.結果 成功構建齣含p53與p14ARF全長基因片段的單啟動子非融閤錶達載體pIRES-p53-p14ARF.RT-PCR,酶切鑒定質粒大小、位點均符閤實驗設計.熒光免疫細胞化學檢測顯示p53暘性細胞同時也錶現為p14ARF免疫反應暘性,轉染後瘤細胞可見散在凋亡現象.結論 pIRES-p53-p14ARF非融閤錶達載體的構建與真覈細胞導入、目的基因錶達成功.
목적 구건단계동자비융합표체재체pIRES-p53-p14ARF병관찰기대골육류세포증식생장적영향급기공능초탐.방법 장p53여p14ARF전장cDNA편마구의차아극륭지pIRES재체중,병통과PCR、매절감정중조질립.용Lipofectamin 2000장야생형pIRES-p53-p14ARF진핵표체재체전염MG-63세포,48 h후채용axiovent200형도치현미경、형광면역세포화학,관찰기재세포내적표체병초보탐구기억류공능.결과 성공구건출함p53여p14ARF전장기인편단적단계동자비융합표체재체pIRES-p53-p14ARF.RT-PCR,매절감정질립대소、위점균부합실험설계.형광면역세포화학검측현시p53양성세포동시야표현위p14ARF면역반응양성,전염후류세포가견산재조망현상.결론 pIRES-p53-p14ARF비융합표체재체적구건여진핵세포도입、목적기인표체성공.
