中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2010年
4期
277-280
,共4页
间质干细胞%肝%细胞,培养的
間質榦細胞%肝%細胞,培養的
간질간세포%간%세포,배양적
目的 建立一种在体外分离、培养人胎儿肝脏来源的间充质干细胞(MSC)的方法,并研究其生物学特性.方法 采用双酶消化法分离获取人胎儿肝脏MSC并进行体外培养,待细胞达80%以上融合时传代,各传代细胞依次记为P1～P10代细胞,并于倒置相差显微镜下观察细胞形态.取P3、P7、P10代细胞,连续培养7 d,观察分析细胞生长曲线.取P5代细胞,采用流式细胞仪检测MSC表面CD34、CD44、CD105、CD13、HLA-ABC、HLA-DR等抗原标志的表达.取P4代细胞,进行体外成骨细胞诱导培养后,采用碱性磷酸酶染色鉴定.冻存传代细胞,分别于2、6个月后复苏细胞,台盼蓝染色计数复苏后细胞存活率.结果 原代细胞3 d贴壁,6 d后开始快速增长并形成集落,11 d左右达80%～90%融合,多呈纤维样;传代培养后细胞维持纤维样形态.传代细胞生长曲线具有共同特征:潜伏期约24～48h,对数增殖期约3～4d,对数增殖期后第5～6天进入平台期.流式细胞仪检测显示,MSC表面CD34、HLA-DR呈阴性表达,CD44、CD105、CD13呈阳性表达,HLA-ABC呈弱阳性表达.碱性磷酸酶染色显示,诱导后细胞的细胞核染成均一的淡蓝色.冻存复苏后细胞存活率达90%以上,且与未冻存传代细胞相比具有相同的生长特性.结论 本研究成功地从人胎儿肝脏培养出MSC,为MSC应用于科学研究和临床治疗提供了新的细胞来源.
目的 建立一種在體外分離、培養人胎兒肝髒來源的間充質榦細胞(MSC)的方法,併研究其生物學特性.方法 採用雙酶消化法分離穫取人胎兒肝髒MSC併進行體外培養,待細胞達80%以上融閤時傳代,各傳代細胞依次記為P1～P10代細胞,併于倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態.取P3、P7、P10代細胞,連續培養7 d,觀察分析細胞生長麯線.取P5代細胞,採用流式細胞儀檢測MSC錶麵CD34、CD44、CD105、CD13、HLA-ABC、HLA-DR等抗原標誌的錶達.取P4代細胞,進行體外成骨細胞誘導培養後,採用堿性燐痠酶染色鑒定.凍存傳代細胞,分彆于2、6箇月後複囌細胞,檯盼藍染色計數複囌後細胞存活率.結果 原代細胞3 d貼壁,6 d後開始快速增長併形成集落,11 d左右達80%～90%融閤,多呈纖維樣;傳代培養後細胞維持纖維樣形態.傳代細胞生長麯線具有共同特徵:潛伏期約24～48h,對數增殖期約3～4d,對數增殖期後第5～6天進入平檯期.流式細胞儀檢測顯示,MSC錶麵CD34、HLA-DR呈陰性錶達,CD44、CD105、CD13呈暘性錶達,HLA-ABC呈弱暘性錶達.堿性燐痠酶染色顯示,誘導後細胞的細胞覈染成均一的淡藍色.凍存複囌後細胞存活率達90%以上,且與未凍存傳代細胞相比具有相同的生長特性.結論 本研究成功地從人胎兒肝髒培養齣MSC,為MSC應用于科學研究和臨床治療提供瞭新的細胞來源.
목적 건립일충재체외분리、배양인태인간장래원적간충질간세포(MSC)적방법,병연구기생물학특성.방법 채용쌍매소화법분리획취인태인간장MSC병진행체외배양,대세포체80%이상융합시전대,각전대세포의차기위P1～P10대세포,병우도치상차현미경하관찰세포형태.취P3、P7、P10대세포,련속배양7 d,관찰분석세포생장곡선.취P5대세포,채용류식세포의검측MSC표면CD34、CD44、CD105、CD13、HLA-ABC、HLA-DR등항원표지적표체.취P4대세포,진행체외성골세포유도배양후,채용감성린산매염색감정.동존전대세포,분별우2、6개월후복소세포,태반람염색계수복소후세포존활솔.결과 원대세포3 d첩벽,6 d후개시쾌속증장병형성집락,11 d좌우체80%～90%융합,다정섬유양;전대배양후세포유지섬유양형태.전대세포생장곡선구유공동특정:잠복기약24～48h,대수증식기약3～4d,대수증식기후제5～6천진입평태기.류식세포의검측현시,MSC표면CD34、HLA-DR정음성표체,CD44、CD105、CD13정양성표체,HLA-ABC정약양성표체.감성린산매염색현시,유도후세포적세포핵염성균일적담람색.동존복소후세포존활솔체90%이상,차여미동존전대세포상비구유상동적생장특성.결론 본연구성공지종인태인간장배양출MSC,위MSC응용우과학연구화림상치료제공료신적세포래원.
