中国农业科技导报
中國農業科技導報
중국농업과기도보
REVIEW OF CHINA AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
4期
78-83,67
,共7页
吕红%田健%初晓宇%伍宁丰
呂紅%田健%初曉宇%伍寧豐
려홍%전건%초효우%오저봉
甲基对硫磷水解酶%正交实验%定点突变
甲基對硫燐水解酶%正交實驗%定點突變
갑기대류린수해매%정교실험%정점돌변
分别自假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes C2-1)和假单胞菌(Pseudomonas sp.1-7)中克隆得到甲基对硫磷水解酶基因ophc2和ophc3,其编码甲基对硫磷水解酶OPHC2和OPHC3的氨基酸序列相似性达98.5%,仅5个氨基酸残基不同,但酶学性质差异很大,特别是对不同底物降解特性有很大差异.OPHC2对甲基对硫磷的催化效率是OPHC3的2.75倍,对乙基对硫磷的催化效率仅为OPHC3的12.9%.为了提高OPHC2对乙基对硫磷的降解活性,以OPHC3的序列为依据,针对5个不同的氨基酸设计正交实验,对OPHC2进行组合突变,最终获得了一个突变体P165S/A169V,对乙基对硫磷的催化效率是OPHC2的1.19倍,对甲基对硫磷的催化效率是OPHC2的1.36倍.
分彆自假產堿假單胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes C2-1)和假單胞菌(Pseudomonas sp.1-7)中剋隆得到甲基對硫燐水解酶基因ophc2和ophc3,其編碼甲基對硫燐水解酶OPHC2和OPHC3的氨基痠序列相似性達98.5%,僅5箇氨基痠殘基不同,但酶學性質差異很大,特彆是對不同底物降解特性有很大差異.OPHC2對甲基對硫燐的催化效率是OPHC3的2.75倍,對乙基對硫燐的催化效率僅為OPHC3的12.9%.為瞭提高OPHC2對乙基對硫燐的降解活性,以OPHC3的序列為依據,針對5箇不同的氨基痠設計正交實驗,對OPHC2進行組閤突變,最終穫得瞭一箇突變體P165S/A169V,對乙基對硫燐的催化效率是OPHC2的1.19倍,對甲基對硫燐的催化效率是OPHC2的1.36倍.
분별자가산감가단포균(Pseudomonas pseudoalcaligenes C2-1)화가단포균(Pseudomonas sp.1-7)중극륭득도갑기대류린수해매기인ophc2화ophc3,기편마갑기대류린수해매OPHC2화OPHC3적안기산서렬상사성체98.5%,부5개안기산잔기불동,단매학성질차이흔대,특별시대불동저물강해특성유흔대차이.OPHC2대갑기대류린적최화효솔시OPHC3적2.75배,대을기대류린적최화효솔부위OPHC3적12.9%.위료제고OPHC2대을기대류린적강해활성,이OPHC3적서렬위의거,침대5개불동적안기산설계정교실험,대OPHC2진행조합돌변,최종획득료일개돌변체P165S/A169V,대을기대류린적최화효솔시OPHC2적1.19배,대갑기대류린적최화효솔시OPHC2적1.36배.
