军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2010年
6期
528-531,539
,共5页
宋直钰%赵敬湘%魏广智%张磊%汤永永%王字玲
宋直鈺%趙敬湘%魏廣智%張磊%湯永永%王字玲
송직옥%조경상%위엄지%장뢰%탕영영%왕자령
基质金属蛋白酶2%黑色素瘤%血红素结合蛋白样结构域%细胞黏附%内皮细胞
基質金屬蛋白酶2%黑色素瘤%血紅素結閤蛋白樣結構域%細胞黏附%內皮細胞
기질금속단백매2%흑색소류%혈홍소결합단백양결구역%세포점부%내피세포
目的 探讨原核表达的人源基质金属蛋白酶2的C端结构域(MMP-2-PEX)对黑色素瘤细胞A375与内皮细胞黏附的影响.方法 利用RT-PCR方法从人成纤维肉瘤细胞HT1080中克隆MMP-2 C端结构域,构建原核表达载体pET-His-PEX;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;盐酸胍裂解包涵体,经镍琼脂糖凝胶柱纯化,透析复性后获得MMP-2-PEX蛋白,随后对其进行Western印迹和质谱鉴定.采用明胶酶谱法检测MMP-2-PEX的活性;采用平行板流动小室系统检测在流动状态下MMP-2-PEX对A375细胞与脐静脉内皮细胞HUVEC黏附的影响,通过小鼠实验性肺转移模型检测MMP-2-PEX对A375细胞在小鼠肺内癌栓形成的影响.结果 Western印迹和质谱鉴定原核表达的MMP-2-PEX蛋白正确,明胶酶谱检测MMP-2-PEX能够明显抑制MMP-2的活性.表达的MMP-2-PEX蛋白能够在流动状态下抑制A375细胞与HUVEC细胞的黏附,其黏附抑制率与MMP-2-PEX蛋白浓度增加成正相关,MMP-2-PEX浓度为12.5,25和50 μg/ml时抑制率分别为32.5%,41.4%和53.9%.用MMP-2-PEX处理后,A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成与对照组相比降低了26.4%. 结论 原核表达的人MMP-2-PEX在体外流动状态下可抑制A375细胞与内皮细胞的黏附,并抑制A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成.
目的 探討原覈錶達的人源基質金屬蛋白酶2的C耑結構域(MMP-2-PEX)對黑色素瘤細胞A375與內皮細胞黏附的影響.方法 利用RT-PCR方法從人成纖維肉瘤細胞HT1080中剋隆MMP-2 C耑結構域,構建原覈錶達載體pET-His-PEX;轉化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達;鹽痠胍裂解包涵體,經鎳瓊脂糖凝膠柱純化,透析複性後穫得MMP-2-PEX蛋白,隨後對其進行Western印跡和質譜鑒定.採用明膠酶譜法檢測MMP-2-PEX的活性;採用平行闆流動小室繫統檢測在流動狀態下MMP-2-PEX對A375細胞與臍靜脈內皮細胞HUVEC黏附的影響,通過小鼠實驗性肺轉移模型檢測MMP-2-PEX對A375細胞在小鼠肺內癌栓形成的影響.結果 Western印跡和質譜鑒定原覈錶達的MMP-2-PEX蛋白正確,明膠酶譜檢測MMP-2-PEX能夠明顯抑製MMP-2的活性.錶達的MMP-2-PEX蛋白能夠在流動狀態下抑製A375細胞與HUVEC細胞的黏附,其黏附抑製率與MMP-2-PEX蛋白濃度增加成正相關,MMP-2-PEX濃度為12.5,25和50 μg/ml時抑製率分彆為32.5%,41.4%和53.9%.用MMP-2-PEX處理後,A375細胞在小鼠肺內癌栓的形成與對照組相比降低瞭26.4%. 結論 原覈錶達的人MMP-2-PEX在體外流動狀態下可抑製A375細胞與內皮細胞的黏附,併抑製A375細胞在小鼠肺內癌栓的形成.
목적 탐토원핵표체적인원기질금속단백매2적C단결구역(MMP-2-PEX)대흑색소류세포A375여내피세포점부적영향.방법 이용RT-PCR방법종인성섬유육류세포HT1080중극륭MMP-2 C단결구역,구건원핵표체재체pET-His-PEX;전화대장간균BL21(DE3),IPTG유도표체;염산고렬해포함체,경얼경지당응효주순화,투석복성후획득MMP-2-PEX단백,수후대기진행Western인적화질보감정.채용명효매보법검측MMP-2-PEX적활성;채용평행판류동소실계통검측재류동상태하MMP-2-PEX대A375세포여제정맥내피세포HUVEC점부적영향,통과소서실험성폐전이모형검측MMP-2-PEX대A375세포재소서폐내암전형성적영향.결과 Western인적화질보감정원핵표체적MMP-2-PEX단백정학,명효매보검측MMP-2-PEX능구명현억제MMP-2적활성.표체적MMP-2-PEX단백능구재류동상태하억제A375세포여HUVEC세포적점부,기점부억제솔여MMP-2-PEX단백농도증가성정상관,MMP-2-PEX농도위12.5,25화50 μg/ml시억제솔분별위32.5%,41.4%화53.9%.용MMP-2-PEX처리후,A375세포재소서폐내암전적형성여대조조상비강저료26.4%. 결론 원핵표체적인MMP-2-PEX재체외류동상태하가억제A375세포여내피세포적점부,병억제A375세포재소서폐내암전적형성.
