CAJ | 학술논문

卵特异性连接组蛋白(oocyte-specific linker histone H1,H1foo)是在哺乳动物卵母细胞与早期胚胎内特异表达的连接组蛋白,它在卵母细胞生长成熟、受精及胚胎发育中起关键性作用.本研究旨在克隆猪H1foo基因,并构建其真核表达载体.首先利用5'RACE和RT-PCR的方法获得猪H1foo基因的CDS区,并提交GenBank,登录号为HQ915640;然后将H1foo基因的CDS区连接到载体pMD19-T上,经酶切后定向克隆到表达载体pVenus上,从而构建pVenus-H1foo真核表达载体；用脂质体2000介导重组质粒pVenus-H1foo转染Hela细胞,荧光显微镜下观察、RT-PCR检测,确定重组质粒在Hela细胞内的表达和定位；最后通过体外转录试剂盒将H1foo-venus体外转录为mRNA,并显微注射至猪卵母细胞,荧光显微镜观察其表达和定位.序列分析表明猪Hlfoo基因CDS区全长1 041bp,编码346个氨基酸,蛋白分子量为36.45kD,在核苷酸水平上与牛、人和小鼠H1foo基因的相似度分别为75.7％、67.9％和54.3％；真核表达载体pVenus-H1foo转染后,能在He(l)a细胞中表达并可以准确的定位在细胞核；体外转录的H1foo-venusmRNA显微注射猪卵后其融合蛋白也能准确定位于细胞核.本研究克隆了猪H1foo基因并成功构建其真核表达载体；体外转录的H1foo-venusmRNA能在猪卵中正确表达和定位,为进一步研究H1foo在猪卵母细胞成熟以及核移植过程中的作用提供了基础资料.
란특이성련접조단백(oocyte-specific linker histone H1,H1foo)시재포유동물란모세포여조기배태내특이표체적련접조단백,타재란모세포생장성숙、수정급배태발육중기관건성작용.본연구지재극륭저H1foo기인,병구건기진핵표체재체.수선이용5'RACE화RT-PCR적방법획득저H1foo기인적CDS구,병제교GenBank,등록호위HQ915640;연후장H1foo기인적CDS구련접도재체pMD19-T상,경매절후정향극륭도표체재체pVenus상,종이구건pVenus-H1foo진핵표체재체；용지질체2000개도중조질립pVenus-H1foo전염Hela세포,형광현미경하관찰、RT-PCR검측,학정중조질립재Hela세포내적표체화정위；최후통과체외전록시제합장H1foo-venus체외전록위mRNA,병현미주사지저란모세포,형광현미경관찰기표체화정위.서렬분석표명저Hlfoo기인CDS구전장1 041bp,편마346개안기산,단백분자량위36.45kD,재핵감산수평상여우、인화소서H1foo기인적상사도분별위75.7％、67.9％화54.3％；진핵표체재체pVenus-H1foo전염후,능재He(l)a세포중표체병가이준학적정위재세포핵；체외전록적H1foo-venusmRNA현미주사저란후기융합단백야능준학정위우세포핵.본연구극륭료저H1foo기인병성공구건기진핵표체재체；체외전록적H1foo-venusmRNA능재저란중정학표체화정위,위진일보연구H1foo재저란모세포성숙이급핵이식과정중적작용제공료기출자료.