江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
4期
880-885
,共6页
姚大伟%叶可萍%江芸%徐幸莲%周光宏
姚大偉%葉可萍%江蕓%徐倖蓮%週光宏
요대위%협가평%강예%서행련%주광굉
猪肉%沙门氏菌%实时荧光定量PCR%扩增内标
豬肉%沙門氏菌%實時熒光定量PCR%擴增內標
저육%사문씨균%실시형광정량PCR%확증내표
建立含扩增内标的生鲜猪肉中沙门氏菌Real-time PCR检测方法,以提高检测的准确性.根据沙门氏菌ttrBCA基因设计引物和探针,利用犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因构建和目标基因相同引物的扩增内标,并对退火温度和引物、探针的浓度进行优化,建立含扩增内标的Real-time PCR检测方法,用该方法对人工污染生鲜猪肉样品进行检测.结果显示,该方法对19株非沙门氏菌检测结果均为阴性,对36株沙门氏菌检测结果均为阳性,特异性较好,热学裂解制备DNA模板法检测灵敏度达100 CFU/ml,试剂盒提取DNA制备模板法检测灵敏度达1μl2.66拷贝.在25μl反应体系中加入扩增内标103拷贝不影响目标基因的扩增,该方法能在12 h内对人工污染沙门氏菌的肉样做出检测.该方法不仅可快速检测生鲜猪肉中的沙门氏菌,同时避免了假阳性现象的产生.
建立含擴增內標的生鮮豬肉中沙門氏菌Real-time PCR檢測方法,以提高檢測的準確性.根據沙門氏菌ttrBCA基因設計引物和探針,利用犬瘟熱病毒覈衣殼蛋白基因構建和目標基因相同引物的擴增內標,併對退火溫度和引物、探針的濃度進行優化,建立含擴增內標的Real-time PCR檢測方法,用該方法對人工汙染生鮮豬肉樣品進行檢測.結果顯示,該方法對19株非沙門氏菌檢測結果均為陰性,對36株沙門氏菌檢測結果均為暘性,特異性較好,熱學裂解製備DNA模闆法檢測靈敏度達100 CFU/ml,試劑盒提取DNA製備模闆法檢測靈敏度達1μl2.66拷貝.在25μl反應體繫中加入擴增內標103拷貝不影響目標基因的擴增,該方法能在12 h內對人工汙染沙門氏菌的肉樣做齣檢測.該方法不僅可快速檢測生鮮豬肉中的沙門氏菌,同時避免瞭假暘性現象的產生.
건립함확증내표적생선저육중사문씨균Real-time PCR검측방법,이제고검측적준학성.근거사문씨균ttrBCA기인설계인물화탐침,이용견온열병독핵의각단백기인구건화목표기인상동인물적확증내표,병대퇴화온도화인물、탐침적농도진행우화,건립함확증내표적Real-time PCR검측방법,용해방법대인공오염생선저육양품진행검측.결과현시,해방법대19주비사문씨균검측결과균위음성,대36주사문씨균검측결과균위양성,특이성교호,열학렬해제비DNA모판법검측령민도체100 CFU/ml,시제합제취DNA제비모판법검측령민도체1μl2.66고패.재25μl반응체계중가입확증내표103고패불영향목표기인적확증,해방법능재12 h내대인공오염사문씨균적육양주출검측.해방법불부가쾌속검측생선저육중적사문씨균,동시피면료가양성현상적산생.
