华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2004年
5期
489-491
,共3页
牛传双%方六荣%肖少波%张辉%陈焕春
牛傳雙%方六榮%肖少波%張輝%陳煥春
우전쌍%방륙영%초소파%장휘%진환춘
绿荧光蛋白%突变体mut4EGFP%表达%纯化
綠熒光蛋白%突變體mut4EGFP%錶達%純化
록형광단백%돌변체mut4EGFP%표체%순화
增强型绿荧光蛋白突变体mut4EGFP(EGFP/V163A/S175G)是一种发光能力更强、更稳定的新型绿色荧光蛋白.为了获得大量高纯度的蛋白,将mut4EGFP基因插入原核表达载体pTWIN1中,使之与几丁质结合域(CBD)-内含肽(intein)融合,获得原核表达质粒pTWIN-M4.将pTWIN-M4转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,CBD-intein-mut4EGFP融合蛋白在BL21(DE3)plysS中获得高效表达并以可溶性蛋白的形式存在.进一步采用几丁质柱纯化系统对表达产物进行纯化,得到了高纯度的mut4EGFP.
增彊型綠熒光蛋白突變體mut4EGFP(EGFP/V163A/S175G)是一種髮光能力更彊、更穩定的新型綠色熒光蛋白.為瞭穫得大量高純度的蛋白,將mut4EGFP基因插入原覈錶達載體pTWIN1中,使之與幾丁質結閤域(CBD)-內含肽(intein)融閤,穫得原覈錶達質粒pTWIN-M4.將pTWIN-M4轉化大腸桿菌BL21(DE3)plysS,IPTG誘導後進行SDS-PAGE電泳分析,結果顯示,CBD-intein-mut4EGFP融閤蛋白在BL21(DE3)plysS中穫得高效錶達併以可溶性蛋白的形式存在.進一步採用幾丁質柱純化繫統對錶達產物進行純化,得到瞭高純度的mut4EGFP.
증강형록형광단백돌변체mut4EGFP(EGFP/V163A/S175G)시일충발광능력경강、경은정적신형록색형광단백.위료획득대량고순도적단백,장mut4EGFP기인삽입원핵표체재체pTWIN1중,사지여궤정질결합역(CBD)-내함태(intein)융합,획득원핵표체질립pTWIN-M4.장pTWIN-M4전화대장간균BL21(DE3)plysS,IPTG유도후진행SDS-PAGE전영분석,결과현시,CBD-intein-mut4EGFP융합단백재BL21(DE3)plysS중획득고효표체병이가용성단백적형식존재.진일보채용궤정질주순화계통대표체산물진행순화,득도료고순도적mut4EGFP.
